Ląstelių bendros RNR išskyrimo rinkinys Total RNR išskyrimo valymo rinkiniai iš ląstelės
Komplekto aprašymas:
Iš įvairių kultivuotų ląstelių per 11 minučių galima gauti labai išgrynintą ir aukštos kokybės bendrą RNR.
Be RNazės
Veikia kambario temperatūroje (15-25 ℃)
Su DNR valymo kolonele
Didelis RNR derlius
Greitai: Užbaikite ekstrahavimą per 11 minučių
Sauga: Nėra Organinė cheminė medžiaga
apibūdinimas
Šiame rinkinyje naudojama Foregene sukurta sukimo kolonėlė ir formulė, kuri gali efektyviai išgauti labai gryną ir aukštos kokybės bendrą RNR iš ląstelių, kultivuotų 96, 24, 12 ir 6 šulinėlių plokštelėse.
Rinkinyje yra efektyvi DNR valymo kolonėlė, kuri gali lengvai atskirti supernatantą ir ląstelių lizatą, surišti ir pašalinti genominę DNR.Operacija paprasta ir taupo laiką.
TTik RNR kolonėlė gali efektyviai surišti RNR su unikalia formule.Vienu metu galima apdoroti daug mėginių.
Komplekto komponentai
| Komplekto sudėtis | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Buferis cRL1* | 25 ml | 100 ml |
| Buferis cRL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buferis RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buferis RW2 | 24 ml | 96 ml |
| Be RNazės ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| Tik RNR stulpelis | 50 | 200 |
| DNR valymo kolonėlė | 50 | 200 |
| Instrukcija | 1 | 1 |
* Darbo metu mūvėkite pirštines ir imkitės apsaugos priemonių, nes buferyje cRL1 ir buferyje RW1 yra dirginančių chaotropinių druskų.
Savybės ir privalumai
■ Visas procesas vyksta kambario temperatūroje (15-25 ℃), be ledo vonios ir žemos temperatūros centrifugavimo.
■ Visas rinkinys neturi RNazės, todėl nereikia jaudintis dėl RNR degradacijos.
■ DNR valymo kolonėlė specifiškai suriša DNR, todėl rinkinys gali pašalinti genomo DNR užterštumą nepridedant papildomos DNazės.
■ Didelė RNR išeiga: tik RNR kolonėlė ir unikali formulė gali efektyviai išvalyti RNR.
■ Greitas greitis: lengva valdyti ir užbaigti per 11 minučių.
■ Sauga: nereikia jokio organinio reagento.
■ Aukšta kokybė: išgryninta RNR yra labai gryna, be baltymų ir kitų priemaišų, todėl ją galima atlikti atliekant įvairius tolesnius eksperimentus.
Komplekto taikymas
Jis tinka visos RNR ekstrahavimui ir gryninimui iš kultivuotų ląstelių 96, 24, 12 ir 6 šulinėlių plokštelėse.
Darbo eiga
Diagrama
„Cell Total RNA Isolation Kit“ agarozės gelio baterijos diagramoje buvo apdorotas aukščiau nurodytas skirtingas ląstelių skaičius, 20 μl tūrio eliuavimas, paimkite 2 μl išgrynintos bendros RNR 1%.
Sandėliavimas ir tinkamumo laikas
Rinkinį galima laikyti 12 mėnesių kambario temperatūroje (15–25 ℃) arba 2–8 ℃ ilgiau (24 mėnesius).
Buferis cRL1 gali būti laikomas 4 ℃ temperatūroje 1 mėnesį po to, kai pridedama 2-hidroksi-1-etantiolio (nebūtina).
RNR nėra išgaunama arba RNR išeiga yra maža
Dažnai yra įvairių veiksnių, turinčių įtakos atkūrimo efektyvumui, pavyzdžiui: audinių mėginio RNR kiekis, veikimo būdas, eliuavimo tūris ir kt.
1. Eksploatacijos metu atlikta ledo vonia arba kriogeninė (4 °C) centrifuga.
Rekomendacija: Viso proceso metu naudokite kambario temperatūroje (15-25 °C), nenaudokite ledo vonios ir centrifuguokite žemoje temperatūroje.
2. Netinkamas mėginio konservavimas arba pernelyg ilgas mėginio laikymo laikas.
Rekomendacija: Mėginius laikykite -80 °C temperatūroje arba užšaldykite skystame azote ir venkite pakartotinio užšaldymo-atšildymo;pabandykite naudoti šviežius audinius arba kultivuotas ląsteles RNR ekstrahavimui.
3. Nepakankama mėginio lizė.
Rekomendacija: homogenizuodami audinį įsitikinkite, kad audinys yra pakankamai homogenizuotas ir kad audinių ląstelės pakankamai suskilusios, kad paaiškintų RNR išsiskyrimą.
4. Eliuentas įpiltas netinkamai.
Rekomendacija: patvirtinkite, kad ddH yra be RNase2O įlašinama į gryninimo kolonėlės membranos vidurį.
5. Į buferį RL2 arba buferį RW2 nebuvo pridėtas tinkamas absoliutaus etanolio tūris.
Rekomendacija: vadovaukitės instrukcijomis, įpilkite reikiamą kiekį absoliutaus etanolio į Buffer RL2 ir Buffer RW2 ir gerai išmaišykite prieš naudodami rinkinį.
6. Audinių mėginio dozė netinkama.
Rekomendacija: naudokite 10–20 mg audinio arba (1–5) × 106ląstelių 500 μl buferio RL1, nes per didelis audinių naudojimas gali sumažinti RNR ekstrahavimą.
7. Netinkamas eliuavimo tūris arba nepilnas eliuavimas.
Rekomendacija: gryninimo kolonėlės eliuavimo tūris yra 50-200 μl;jei eliuavimo efektas nepatenkinamas, rekomenduojama pratęsti kambario temperatūros įdėjimo laiką įpylus pašildyto RNase-Free ddH2O, pvz., 5-10 min.
8. Po buferio RW2 plovimo valymo kolonėlėje yra etanolio likučių.
Rekomendacija: Jei po buferio RW2 plovimo, tuščio mėgintuvėlio centrifugavimo 1 min. lieka etanolio, tuščio mėgintuvėlio centrifugavimo operacijos laikas gali būti padidintas iki 2 min. arba valymo kolonėlę galima pastatyti kambario temperatūroje 5 min., kad būtų tinkamai pašalintas etanolio likutis.
Išgryninta RNR suskaidoma
Išgrynintos RNR kokybė yra susijusi su tokiais veiksniais kaip mėginio išsaugojimas, užteršimas Rnaze, manipuliavimas ir kt.
1. Audinių mėginiai nėra laikomi laiku.
Rekomendacija: Jei po paėmimo audinių mėginiai ar ląstelės nepanaudojami laiku, nedelsiant šaldykite -80 °C temperatūroje arba skystu azotu.Norėdami išgauti RNR, kai tik įmanoma, naudokite naujai paimtą audinio ar ląstelės mėginį.
2. Pakartotinis audinių mėginių užšaldymas-atšildymas.
Rekomendacija: Laikant audinių mėginius, geriausia juos supjaustyti į mažus gabalėlius, kad būtų išsaugotas, o naudojant vieną iš gabalėlių pašalinti, kad mėginys nepasikartotų užšalimas-atšildymas ir RNR nesuirtų.
3. Operacijos metu įvesta RNazė arba nedėvima vienkartinių pirštinių, kaukių ir pan.
Rekomendacija: RNR ekstrahavimo eksperimentus geriausia atlikti atskirose RNR manipuliavimo patalpose, o stalas prieš eksperimentą nuvalomas.
Eksperimento metu dėvėkite vienkartines pirštines ir kaukes, kad sumažintumėte RNR degradaciją, kurią sukelia RNazės įvedimas.
4. Reagentai naudojimo metu yra užteršti RNaze.
Rekomendacija: susijusiems eksperimentams pakeiskite nauju gyvūnų viso RNR izoliavimo rinkiniu.
5. RNR manipuliavimui naudojami centrifugos mėgintuvėliai, antgaliai ir kt. yra užteršti RNaze.
Rekomendacija: įsitikinkite, kad centrifugos mėgintuvėliai, antgaliai, pipetės ir kt., naudojami RNR ekstrahavimui, yra be RNazės.
Išgryninta gauta RNR veikia tolesnius eksperimentus
RNR, išgryninta valymo kolonėlėje, jei druskos jonai, baltymų kiekis yra per didelis, turės įtakos tolesniam eksperimentui, pavyzdžiui: atvirkštinė transkripcija, Northern Blot ir kt.
1. Eliuuota RNR turi druskos jonų likučių.
Rekomendacija: Patvirtinkite, kad į buferį RW2 įpiltas reikiamas tūris etanolio, ir atlikite 2 valymo kolonėlės plovimus nurodytu veikimo išcentriniu greičiu;jei yra druskos jonų likučių, palikite valymo kolonėlę į buferį RW2 5 minutes kambario temperatūroje ir atlikite centrifugavimą, kad maksimaliai pašalintumėte druskos užterštumą.
2. Etanolio likutis eliuuotoje RNR.
Rekomendacija: Patvirtinkite, kad po buferio RW2 plovimo tuščio mėgintuvėlio centrifugavimo operaciją atlikite nurodytu veikimo greičiu, padidinkite tuščio mėgintuvėlio centrifugavimo laiką iki 2 min, jei vis dar yra etanolio likučių, arba palikite kambario temperatūroje 5 m.
