Viruso DNR ir RNR išskyrimo rinkinys Virusinės DNR ir RNR ekstrahavimo valymo paruošimo rinkiniai
Specifikacijos
50 pasiruošimų, 200 pasiruošimų
Virusinės RNR Nukleino rūgščių gryninimo ekstrahavimo izoliacijos rinkinyje naudojama Foregene sukurta sukimo kolonėlė ir formulė, kuri gali efektyviai išgauti labai gryną ir aukštos kokybės virusinę RNR iš tokių mėginių kaip plazma, serumas, kūno skystis be ląstelių ir ląstelių kultūros supernatantas.Į rinkinį specialiai pridedamas linijinis akrilamidas, kuris gali lengvai užfiksuoti nedidelius RNR kiekius iš mėginių.Tik RNR kolonėlė gali efektyviai surišti RNR.Rinkinys vienu metu gali apdoroti daug mėginių.
Visame rinkinyje nėra RNazės, todėl išgryninta RNR nebus suskaidyta.Buferis viRW1 ir buferis viRW2 gali užtikrinti, kad gauta virusinė nukleorūgštis būtų be baltymų, nukleazės ar kitų priemaišų, kurios gali būti tiesiogiai naudojamos tolesniems molekulinės biologijos eksperimentams.
Komplekto komponentai
| Linijinis akrilamidas |
| Buferis DRL |
| Buferis RW1, buferis RW2 |
| DdH be RNazių2O |
| DNR/RNR stulpelis |
| Instrukcijos |
Savybės ir privalumai
■ Veikimas kambario temperatūroje (15-25 ℃) viso proceso metu, be ledo vonios ir centrifugavimo žemoje temperatūroje.
■ Pilnas rinkinys be RNazių, nereikia jaudintis dėl RNR degradacijos.
■ Didelė nukleorūgščių išeiga: tik DNR/RNR Kolonėlė ir unikali formulė gali efektyviai išvalyti DNR ir RNR.
■ Didelė mėginių apdorojimo talpa: kiekvieną kartą galima apdoroti iki 200 μl mėginių.
■ Greitas greitis: lengva valdyti ir užbaigti per 20 minučių.
■ Sauga: nereikia jokio organinio reagento.
■ Aukšta kokybė: išgryninti RNR fragmentai yra labai gryni, juose nėra baltymų ir kitų priemaišų ir gali būti naudojami įvairiems eksperimentiniams tikslams.
Komplekto taikymas
Jis tinkamas virusinės nukleino rūgšties ekstrahavimui ir gryninimui tokiuose mėginiuose kaip plazma, serumas, kūno skystis be ląstelių ir ląstelių kultūros supernatantas.
Darbo eiga
Diagrama
Sandėliavimas ir galiojimo laikas
■ Šį rinkinį galima laikyti 24 mėnesius sausomis sąlygomis kambario temperatūroje (15-25 ℃);jei reikia laikyti ilgiau, galima laikyti 2–8 ℃ temperatūroje.
■ Linijinio akrilamido tirpalą galima laikyti kambario temperatūroje 7 dienas;gavus rinkinį, prašome jį išimti ir laikyti -20°C temperatūroje.
■ Pridėjus linijinio akrilamido į buferinį DRL, jį galima laikyti 2–8°C temperatūroje iki 48 valandų.Naudokite paruoštą tirpalą.
Problemų analizės vadovas
Toliau pateikiama problemų, su kuriomis galima susidurti ekstrahuojant viruso DNR/RNR, analizė, tikintis, kad tai bus naudinga jūsų eksperimentams.Be to, sprendžiant kitas eksperimentines ar technines problemas, išskyrus naudojimo instrukcijas ir problemų analizę, jums padės speciali techninė pagalba.Jei turite kokių nors poreikių, susisiekite su mumis: 028-83360257 arba el.
Tech@foregene.com.
Nėra nukleino rūgščių ekstrahavimo arba maža nukleorūgščių išeiga
Paprastai yra daug veiksnių, turinčių įtakos regeneravimo efektyvumui, pavyzdžiui: mėginio nukleorūgščių kiekis, veikimo būdas, eliuavimo tūris ir kt.
Įprastų priežasčių analizė:
1. Procedūros metu buvo atlikta ledo vonia arba žemos temperatūros (4°C) centrifugavimas.
Patarimas: Viso proceso metu naudokite kambario temperatūroje (15-25°C), nenaudokite ledo vonios ir žemos temperatūros centrifugavimo.
2. Mėginys buvo laikomas netinkamai arba mėginys buvo laikomas per ilgai.
Rekomendacija: mėginius laikyti -80°C temperatūroje ir vengti pakartotinio užšaldymo ir atšildymo;pabandykite naudoti šviežiai paimtus mėginius nukleino rūgščių ekstrakcijai.
3. Nepakankama mėginio lizė.
Rekomendacija: įsitikinkite, kad mėginys ir lizės darbinis tirpalas yra kruopščiai sumaišyti ir inkubuojami kambario temperatūroje (15-25°C) 10 minučių.
4. Neteisingas eliuento pridėjimas.
Patarimas: Įsitikinkite, kad RNase-Free ddH2O būtų lašinamas į gryninimo kolonėlės membranos vidurį, ir nenuleiskite jo ant valymo kolonėlės žiedo.
5. Į buferį RW2 nebuvo pridėtas tinkamas absoliutaus etanolio tūris.
Patarimas: vadovaukitės instrukcijomis, įpilkite reikiamą kiekį absoliutaus etanolio į buferį RW2 ir gerai išmaišykite prieš naudodami rinkinį.
6. Netinkamas mėginio tūris.
Patarimas: 200 µl mėginio apdorojama kiekvienam 500 µl buferinio DRL.Per didelis mėginio apdorojimas sumažins nukleorūgščių ekstrahavimo išeigą.
7. Netinkamas eliuavimo tūris arba nepilnas eliuavimas.
Rekomendacija: gryninimo kolonėlės eliuento tūris yra 30-50μl;jei eliuavimo efektas nepatenkinamas, rekomenduojama pratęsti laiką kambario temperatūroje, įpylus pašildyto RNase-Free ddH2O, pvz., 5-10min.
8. Po plovimo buferiu RW2 ant kolonėlės lieka etanolio.
Patarimas: Jei po centrifugavimo su buferiu RW2 2 minutes lieka etanolio, po centrifugavimo kolonėlę galima laikyti kambario temperatūroje 5 minutėms, kad būtų visiškai pašalintas etanolio likutis.
Išgryninta nukleorūgštis suskaidoma
Išgrynintos nukleino rūgšties kokybė yra susijusi su mėginio išsaugojimu, RNazės užterštumu, veikimu ir kitais veiksniais.Įprastų priežasčių analizė:
1. Paimti mėginiai nebuvo laiku saugomi.
Patarimas: Jei po paėmimo mėginys laiku nepanaudojamas, nedelsdami laikykite jį -80°C žemoje temperatūroje.RNR ekstrahavimui pabandykite naudoti ką tik paimtus mėginius.
2. Paimkite mėginius ir pakartotinai užšaldykite bei atitirpinkite.
Patarimas: Imant ir saugant mėginius vengti užšalimo ir atšildymo (ne daugiau kaip vieną kartą), kitaip sumažės nukleorūgščių išeiga.
3. Operacinėje įvedama RNazė arba nedėvimos vienkartinės pirštinės, kaukės ir pan.
Rekomendacija: RNR ekstrahavimo eksperimentus geriausia atlikti atskiroje RNR operacinėje patalpoje, o laboratorijos stalą prieš eksperimentą reikia nuvalyti.
Eksperimento metu dėvėkite vienkartines pirštines ir kaukes, kad išvengtumėte RNR degradacijos, kurią sukelia RNazės įvedimas.
4. Naudojimo metu reagentas buvo užterštas RNaze.
Rekomendacija: susijusiems eksperimentams pakeiskite nauju virusinės DNR/RNR izoliacijos rinkiniu.
5. RNR manipuliavimui naudojami centrifugos mėgintuvėliai ir pipetės antgaliai yra užteršti RNaze.
Patarimas: Įsitikinkite, kad centrifugos mėgintuvėliai, pipetės antgaliai, pipetės ir kt., naudojami RNR ekstrahavimui, yra be RNazės.
Išgryninta nukleorūgštis turi įtakos tolesniems eksperimentams
DNR ir RNR, išgrynintos valymo kolonėlėje, jei druskos jonų ir baltymų kiekis yra per didelis, tai turės įtakos tolesniems eksperimentams, tokiems kaip: PGR amplifikacija, atvirkštinė transkripcija ir kt.
1. Eliuuota DNR ir RNR turi likutinių druskų jonų.
Patarimas: Įsitikinkite, kad į buferį RW2 buvo įpiltas reikiamas kiekis absoliutaus etanolio, ir du kartus išplaukite valymo kolonėlę naudojimo instrukcijose nurodytu centrifugavimo greičiu;Atlikite centrifugavimą, kad sumažintumėte druskos jonų užteršimą.
2. Išplautoje DNR ir RNR yra etanolio likučių.
Siūlymas: Patvirtinus plovimą Buffer RW2, atlikti tuščio mėgintuvėlio centrifugavimą naudojimo instrukcijoje nurodytu centrifugavimo greičiu;Jei vis dar yra etanolio likučių, tuščią mėgintuvėlį galite centrifuguoti ir 5 minutėms palaikyti kambario temperatūroje, kad kuo daugiau pašalintumėte etanolio likučius.
Instrukcijų vadovai:
Viruso DNR ir RNR izoliavimo rinkinio naudojimo vadovas
