Virusinės RNR išskyrimo rinkinys, skirtas virusinės RNR valymui iš plazmos, serumo ir kitų mėginių
Komplekto aprašymas:
Kat.Nr.RE-02011/02014
Virusinės RNR išvalymui iš plazmos, serumo, kūno skysčių be ląstelių, ląstelių kultūros supernatantų.
Greitai išskirkite ir išvalykite virusinę RNR iš tokių mėginių kaip plazma, serumas, kūno skysčiai be ląstelių ir ląstelių kultūros supernatantai.
-Nereikia jaudintis dėl RNR degradacijos.Visas rinkinys yra be RNazės
-Paprasta – visos operacijos atliekamos kambario temperatūroje
-Greitas – operacija gali būti baigta per 20 minučių
-Didelė RNR išeiga: tik RNR kolonėlė ir unikali formulė gali efektyviai išvalyti RNR
- Saugus – nenaudojamas organinis reagentas
-Didelė mėginių apdorojimo talpa – kiekvieną kartą galima apdoroti iki 200μl mėginių.
- Aukšta kokybė – išgryninta RNR yra labai gryna, be baltymų ir kitų priemaišų ir gali būti pritaikyta įvairiems eksperimentiniams tikslams.
Aprašymai
Rinkinyje naudojama Foregene sukurta sukimo kolonėlė ir formulė, kuri gali efektyviai išgauti labai gryną ir aukštos kokybės virusinę RNR iš tokių mėginių kaip plazma, serumas, kūno skystis be ląstelių ir ląstelių kultūros supernatantas.Į rinkinį specialiai pridedamas linijinis akrilamidas, kuris gali lengvai užfiksuoti nedidelius RNR kiekius iš mėginių.Tik RNR kolonėlė gali efektyviai surišti RNR.Rinkinys vienu metu gali apdoroti daug mėginių.
Visame rinkinyje nėra RNazės, todėl išgryninta RNR nebus suskaidyta.Buferis viRW1 ir buferis viRW2 gali užtikrinti, kad gauta virusinė nukleorūgštis būtų be baltymų, nukleazės ar kitų priemaišų, kurios gali būti tiesiogiai naudojamos tolesniems molekulinės biologijos eksperimentams.
Specifikacijos
50 pasiruošimų, 200 pasiruošimų
Komplekto komponentai
| Linijinis akrilamidas |
| Buferis viRL |
| Buferis viRW1, buferis viRW2 |
| DdH be RNazių2O |
| Tik RNR stulpelis |
| Instrukcijos |
Savybės ir privalumai
-Nereikia jaudintis dėl RNR degradacijos.Visas rinkinys yra be RNazės
-Paprasta – visos operacijos atliekamos kambario temperatūroje
-Greitas – operacija gali būti baigta per 20 minučių
-Didelė RNR išeiga: tik RNR kolonėlė ir unikali formulė gali efektyviai išvalyti RNR
- Saugus – nenaudojamas organinis reagentas
-Didelė mėginių apdorojimo talpa – kiekvieną kartą galima apdoroti iki 200μl mėginių.
- Aukšta kokybė – išgryninta RNR yra labai gryna, be baltymų ir kitų priemaišų ir gali būti pritaikyta įvairiems eksperimentiniams tikslams.
Komplekto parametrai
Komplekto taikymas:
Jis tinkamas virusinės RNR ekstrahavimui ir gryninimui tokiuose mėginiuose kaip plazma, serumas, kūno skystis be ląstelių ir ląstelių kultūros supernatantas.
Darbo eiga
Laikymo sąlygos
- Rinkinį galima laikyti 24 mėnesius kambario temperatūroje (15-25 ℃) arba 2-8 ℃ ilgiau.
-Linijinį akrilamido tirpalą kambario temperatūroje galima laikyti 7 dienas.Gavę rinkinį, išimkite Linear Acrylamide tirpalą ir laikykite jį -20 ℃ temperatūroje.
-Pridėjus linijinio akrilamido į buferį viRL, jis gali būti laikomas 2–8 ℃ temperatūroje iki 48 valandų.Naudokite šviežiai paruoštą tirpalą.
Problemų analizės vadovai
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
RNR negalima išgauti arba nukleino rūgšties išeiga yra maža
Paprastai yra daug veiksnių, turinčių įtakos regeneravimo efektyvumui, pavyzdžiui: mėginio RNR kiekis, veikimo būdas, eliuavimo tūris ir kt.
Įprastų priežasčių analizė:
1.Ledo vonia arba žemos temperatūros (4 °C) centrifugavimas veikimo metu.
Patarimas: Kambario temperatūros (15-25 °C) veikimas, niekada nenaudokite ledo vonios ir žemos temperatūros centrifugos.
2. Netinkamas mėginių laikymas arba per ilgas mėginių laikymas.
Patarimas: Mėginius laikykite -80 °C temperatūroje arba užšaldykite skystame azote, venkite pakartotinio užšaldymo ir atšildymo;pabandykite naudoti ką tik paimtus mėginius RNR ekstrakcijai.
3. Nepakankama mėginio lizė
Rekomendacija: įsitikinkite, kad mėginys ir darbinis tirpalas (linijinis akrilamidas) buvo kruopščiai sumaišyti ir inkubuojami 10 minučių kambario temperatūroje (15-25 °C).
4. Eliuentas buvo pridėtas neteisingai
Rekomendacija: Įsitikinkite, kad RNase-Free ddH2O būtų pridėta į valymo kolonėlės membranos vidurį
5. Netinkamas bevandenio etanolio kiekis buferyje viRW2
Patarimas: vadovaukitės instrukcijomis, įpilkite reikiamą kiekį bevandenio etanolio į buferį viRW2 ir gerai išmaišykite prieš naudodami rinkinį.
6.Netinkamas mėginio naudojimas.
Siūlymas: 200 µl mėginio 500 µl buferio viRL.Per didelis mėginio tūris sumažins RNR ekstrahavimo greitį.
7.Netinkamas eliuavimo tūris arba nepilnas eliuavimas.
Siūlymas: gryninimo kolonėlės eliuento tūris yra 30-50μl;jei eliuavimo efektas nėra patenkinamas, rekomenduojama įpilti iš anksto pašildyto RNase-Free ddH2O ir pailginkite laikymo kambario temperatūroje laiką, pvz., 5-10min
8. Išplovus buferiu viRW2, valymo kolonėlėje yra etanolio likučių.
Patarimas: Jei po skalavimo buferiu viRW2 ir centrifugavimo tuščiame mėgintuvėlyje 2 min. lieka etanolio, po centrifugavimo tuščiame mėgintuvėlyje valymo kolonėlę galima palikti kambario temperatūroje 5 min., kad būtų visiškai pašalintas likęs etanolis.
Išgrynintų RNR molekulių skilimas
Išgrynintos RNR kokybė yra susijusi su tokiais veiksniais kaip mėginio saugojimas, užterštumas Rnaze ir veikimas.
Įprastų priežasčių analizė:
1. Paimti mėginiai nebuvo laiku išsaugoti.
Patarimas: Jei po paėmimo mėginys nepanaudojamas laiku, nedelsdami laikykite jį -80 ℃ temperatūroje arba skystame azote.Jei įmanoma, RNR molekulėms išgauti stenkitės naudoti šviežiai paimtus mėginius.
2. Paimti mėginiai buvo pakartotinai užšaldomi ir atitirpinami.
Patarimas: mėginio ėmimo ir laikymo metu vengti pakartotinio užšaldymo ir atšildymo (ne daugiau kaip vieną kartą), kitaip sumažės nukleino rūgšties išeiga.
3. Operacinėje buvo įvesta RNazė arba nedėvėti vienkartinių pirštinių, kaukių ir pan.
Pasiūlymas: RNR molekulių ekstrahavimo eksperimentą geriausia atlikti atskiroje RNR operacinėje patalpoje, o eksperimento stalas prieš eksperimentą nuvalomas.Eksperimento metu dėvėkite vienkartines pirštines ir kaukes, kad išvengtumėte RNR degradacijos, kurią sukelia RNazės įvedimas.
4. Naudojimo metu reagentas yra užterštas RNaze.
Patarimas: susijusiems eksperimentams pakeiskite nauju virusinės RNR izoliacijos rinkiniu.
5. Centrifugos mėgintuvėlių, pipetės antgalių ir tt užteršimas RNaze. Patarimas: Įsitikinkite, kad centrifugos mėgintuvėliuose, pipetės antgaliuose ir pipetėse nėra RNazės.
Išgrynintos RNR molekulės paveikė tolesnius eksperimentus
RNR molekulės, išgrynintos valymo kolonėlėje, turės įtakos tolesniems eksperimentams, jei yra per daug druskos jonų arba baltymų, pvz., atvirkštinė transkripcija, Northern blot ir kt.
1.Iliuotose RNR molekulėse yra likusių druskų jonų.
Rekomendacija: Įsitikinkite, kad į buferį viRW2 buvo įpiltas reikiamas kiekis bevandenio etanolio, ir du kartus išplaukite valymo kolonėlę pagal teisingą centrifugavimo greitį, nurodytą naudojimo instrukcijose；Jei dar liko druskos jonų, į valymo kolonėlę galite įpilti buferio viRW2 ir palikti kambario temperatūroje 5 min.Tada atlikite centrifugavimą, kad kuo labiau pašalintumėte druskos jonų užterštumą
2.Iliuotose RNR molekulėse liko etanolio
Patarimas: įsitikinę, kad valymo kolonėlės buvo išskalautos buferiu viRW2, centrifuguokite tuščiame mėgintuvėlyje pagal naudojimo instrukcijose nurodytą išcentrinį greitį.Jei vis dar liko etanolio, po centrifugavimo tuščiame mėgintuvėlyje jį galima palikti 5 minutėms kambario temperatūroje, kad būtų pašalintas didžiausias likęs etanolis.
Instrukcijų vadovai:
Virusinės RNR izoliacijos rinkinio naudojimo vadovas
