Įvadas:

RNR, mokslinis pavadinimas ribonukleino rūgštis, jos santrumpa kilusi iš RiboNucleic Acid, yra nukleino rūgšties rūšis, susidaranti fosfodiesterio jungtimis sujungiant mažiausiai dešimtis ribonukleotidų.

RNR tyrimo prielaida yra išgauti visą RNR be taršos, o pagrindinį RNR ekstrahavimo principą galima apibendrinti taip:

1. Pirmiausia suardykite ląsteles

2. Tada pašalinkite stambiamolekulines priemaišas (baltymus, lipidus, DNR ir kt.)

3. Galiausiai RNR nusodinama pašalinant druskas ir organinius tirpiklius ir toliau gryninant RNR.

Ekstrahavimo metodo praeitis ir dabartis

Pirmosios kartos RNR ekstrahavimo metodas yra TRIzol nusodinimo metodas (naudojami reagentai yra guanidino izotiocianatas, fenolis, chloroformas ir kt.), kurį išrado senelis Piotr Chomczynski ir močiutė Nicoletta Sacchi, nes šis išradimas leidžia greitai ir lengvai išgauti RNR. Nuo tada prasidėjo RNR tyrimų pakilimas.

Vėliau senelis pardavė šį patentą „Invitrogen“, o „Invitrogen“ išpopuliarino šį metodą pasaulyje ir tapo plačiai naudojamu metodu.

Vėliau Invitrogen įsigijo Thermo!

Reprezentatyvus produktas: Invitrogen TRIzol reagentas

Tačiau TRIzol nusodinimo metodas reikalauja daugkartinio nusodinimo ir RNR ekstrahavimo, o naudojami reagentai yra toksiški ir ilgai veikia.

Todėl atsirado antrosios kartos kolonėlės fermento gryninimo metodas, naudojant silikagelio membraną kaip specifinę nukleorūgščių adsorbcijos medžiagą, siekiant maksimaliai padidinti RNR išgavimą mėginyje, pašalinant kitas priemaišas.

Antros kartos metodas supaprastina operaciją stabilaus veikimo pagrindu, sumažina rizikos faktorių ir pagerina RNR išskyrimo efektyvumą.

Reprezentatyvūs produktai: QIAGEN RNeasy ir dauguma vietinių gaminių

Tačiau tiek pirmosios, tiek antrosios kartos metodai reikalauja naudoti DNazę, kad pašalintų DNR užteršimą, o tai sukelia tam tikrų nepatogumų tolesniems eksperimentams.Likusi DNazė sumažins atvirkštinės transkripcijos efektyvumą ir pirmosios krypties cDNR sintezę, taip paveikdama rezultatų tikslumą.

Todėl trečiosios kartos ekstrahavimo metodas yra optimizuotas antrosios kartos pagrindu.Eksperimentui nereikia pridėti jokių fermentų, o RNR galima lengvai gauti tik dviem stulpeliais.

1 stulpelis: DNR valymo stulpelis DNR išvalyti

2 stulpelis: tik RNR Stulpelis specifiškai adsorbuoja ir atkuria RNR

Tokia paprasta operacija ne tik sutaupo laiko, bet ir palengvina tolesnių eksperimentų vykdymą!

Reprezentatyvūs produktai: QIAGEN RNeasy Plus irForegeneRNR valymo serijos produktai

(RNeasy Plus)

(ForegenoAugalų bendros RNR izoliacijos rinkinys)

Pasakyk tau tyliai!Foregene RNR rinkinyje taip pat yra itin paprastas naudoti RNase Eraser, kuris per 1 minutę gali visiškai pašalinti 400 μg RNazės ant kieto paviršiaus, nepridedant žmogaus organizmui jokių toksiškų medžiagų!

Pav1: Veiklos procesų palyginimo diagrama

Foregene produktai gali užbaigti RNR ekstrahavimą tik dviem dainomis, nesukelkite kitų pavydo jūsų eksperimento eigos!

Pav2:Exeksperimentiniai rezultatai palyginimo diagrama

Pirmoji karta (1: TRIzol)

Antroji karta (2: QIAGEN RNeasy)

Trečioji karta (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

Pav3: qPCR grafikas (amplifikacijos kreivės grafikas)

Pirmoji karta (žalia reiškia TRIzol -, raudona reiškia TRIzol +)

Antroji karta (dangaus mėlyna reiškia QIAGEN RNeasy-, raudona reiškia QIAGEN RNeasy +)

Trečioji karta (mėlyna reiškia QIAGEN RNeasy plus, žalia reiškia Foregene)

(Pastaba: qPCR grafikas „-“ rodo, kad DNazė nebuvo pridėta ir DNR užterštumas nepašalintas. Todėl KT yra didesnis ir rezultatas nėra tikslus; „+“ rodo, kad DNazė buvo pridėta ir DNR užterštumas pašalintas, rezultatas yra tikslus)

Kiekvienas techninis atnaujinimas reiškia, kad eksperimento veikla vystosi paprastesne ir patogesne vartotojui kryptimi.

„Foregene“ siekia padėti daugiau mokslininkų sutaupyti eksperimento laiką ir sąnaudas, gauti kokybiškus eksperimentinius rezultatus ir kartu sukurti vertingesnių mokslinių tyrimų laimėjimų.