Autoriai: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Padalinys: Jiaozhou ligoninė, Dongfang ligoninė, susijusi su Tongji universitetu

Šiuo metu pagrindinis mėginių tipas kvėpavimo takų patogenų nukleino rūgščių aptikimui yra gerklės tepinėlis.Yra daug rūšių dažniausiai naudojamų mėginių konservavimo sprendimų, kuriuos visus reikia atšaldyti arba užšaldyti transportuojant ir sandėliuojant;Sunku kontroliuoti visą žemos temperatūros procesą surinkimo ir transportavimo proceso metu ir sunku užtikrinti kokybės kontrolę prieš bandant mėginius.^[1-2].

RNazė (RNazė) yra endonukleazė, kuri hidrolizuoja RNR, daugiausia nutraukdama fosfodiesterio ryšius tarp nukleotidų.RNazės molekulė yra labai stabili, struktūroje yra disulfidinių jungčių, o jos veiklai nereikia dvivalenčių katijonų, todėl RNazė nėra lengvai denatūruojama, o ją lengva renatūruoti net esant aukštai temperatūrai ar naudojant denatūrantus.Rnazės skirstomos į endogenines ir egzogenines.Endogeninės RNazės gali išsiskirti tuo pačiu metu, kai ląstelės plyšta.Todėl endogeninių RNazių vaidmens pašalinimas yra labai svarbus RNR ekstrahavimo proceso žingsnis.Egzogeninės RNazės yra plačiai paplitusios.Rnazės egzistuoja ore, žmogaus odoje, plaukuose ir seilėse, kurios yra svarbios lengvo RNR skaidymo priežastys.^[3].

Duomenų užklausa

CANS-CL02-A009 „Medicinos laboratorijų kokybės ir kompetencijos akreditavimo gairių taikymas molekulinės diagnostikos srityje“ techniniuose reikalavimuose siūloma pagal paraišką suformuluoti atitinkamus vandens kokybės standartus;Vienkartinės sandarios talpyklos:

RNazė / klasifikacija

(1) RNazė A

Ribonukleazė A (RNazė A), gauta iš galvijų kasos, yra endoribonukleazė, kuri gali specifiškai atakuoti pirimidino liekanų 3' galą RNR, supjaustydama citoziną arba uracilą, susidarantį iš gretimų nukleotidų.Fosfodiesterio jungtis, galutinis reakcijos produktas yra 3′ pirimidino nukleotidas ir oligonukleotidas, kurio gale yra 3′ pirimidino nukleotidas.

(2) RNazė T1

Ribonukleazė T1 (RNazė T1) yra gauta iš Aspergillus orjzae, ji konkrečiai veikia guanino 3'-galinį fosfatą, o skilimo vieta yra tarp guanino 3'-fosfato ir gretimų nukleotidų 5'-hidroksilo.Galutinis reakcijos produktas yra 3′guanilo rūgštis ir oligonukleotidų fragmentai, kurių gale yra 3′guanilo rūgštis.

(3) RNazė H

Ribonukleazė H (RNazė H) pirmą kartą buvo atrasta iš veršelio užkrūčio liaukos audinio, o ją koduojantis genas buvo klonuotas į Escherichia coli.Jis gali specifiškai skaidyti DNR: RNR grandines RNR hibridiniuose dupleksuose, todėl susidaro oligonukleotidai ir mononukleotidai su 3′-OH ir 5′-monofosfato galais, jis negali skaidyti vienos arba dvigrandos DNR ar RNR.

RNazė

Funkcija ir naudojimas

Ribonukleazė gali katalizuoti ribonukleino rūgšties (RNR) skaidymą ir gali būti sintetinama dirbtinai.Vaistinis tepalas lokaliai naudojamas traumoms ir sąnarių skausmams gydyti.Remiantis pranešimais, ribonukleazė gali pakeisti šeimininko ląstelių metabolizmą, slopinti viruso sintezę, slopinti gripo viruso dauginimąsi in vitro ir slopinti vakcinų ir herpeso virusų susidarymą vištienos embrionuose.Klinikinis ribonukleazės kasdieninis į raumenis suleidimas 180 mg, naudingas epideminio encefalito gydymui, gali katalizuoti ribonukleino rūgšties (RNR) skaidymą ir dabar gali būti dirbtinai susintetintas.Vaistinis tepalas lokaliai naudojamas traumoms ir sąnarių skausmams gydyti.Remiantis pranešimais, ribonukleazė gali pakeisti šeimininko ląstelių metabolizmą, slopinti viruso sintezę, slopinti gripo viruso dauginimąsi in vitro ir slopinti vakcinų ir herpeso virusų susidarymą vištienos embrionuose.Klinikinis ribonukleazės vartojimas kasdien į raumenis 180 mg yra naudingas gydant epideminį encefalitą.

RNazė

Inhibitoriaus apibrėžimas

RNazės inhibitoriaus vieneto apibrėžimas: fermento kiekis, reikalingas 50% 5ng RNazės A aktyvumo slopinti, yra vienas vienetas.

Kaip veikia RNazės inhibitoriai

Guanidino izotiocianatas:

Guanidino izotiocianatas yra organinis junginys, kurio molekulinė formulė C2H6N4S.Daugiausia naudojamas biologinėje medicinoje, cheminiuose reagentuose ir kt. Guanidino izotiocianatas yra baltymus lizuojantis agentas, dažnai naudojamas kaip pagrindinis lizės tirpalo komponentas molekulinės diagnostikos reagentuose.Jis gali lizuoti audinį, sunaikinti ląstelių struktūrą ir atskirti nukleorūgštį nuo nukleoproteino ir stipriai denatūruotis į Rnazę.Šiuo metu tai yra veiksmingiausias RNazės inhibitorius.

TRIzol yra naujas bendros RNR ekstrahavimo reagentas, galintis tiesiogiai išgauti bendrą RNR iš ląstelių ar audinių.Jame yra medžiagų, tokių kaip fenolis ir guanidino izotiocianatas, kurios gali greitai ardyti ląsteles ir slopinti ląstelių išskiriamas nukleazes.

(Tačiau guanidino izotiocianatas yra pavojingas laboratorijos tyrėjų sveikatai.)

Rnazinas:

Rūgštinis glikoproteinas, ekstrahuotas iš žiurkės kepenų arba žmogaus blastodermos.Rnazinas yra nekonkurencinis Rnazės inhibitorius, kuris gali prisijungti prie įvairių Rnazių, kad jas inaktyvuotų.

(Daugiau informacijos: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Haukšta temperatūra:

Aukšta temperatūra taip pat yra įprasta baltymų denatūravimo priemonė.

Dietilpirokarbonatas (DEPC):

DEPC yra stiprus, bet neišsamus RNazės inhibitorius, kuris gali slopinti RNazės aktyvumą, derindamasis su RNazės aktyvios grupės aminorūgšties imidazolo žiedu, kad denatūruotų baltymus.

Vanadilo ribonukleozido kompleksas:

Vanadžio oksido jonų ir nukleozidų sudarytas kompleksas, kuris jungiasi su RNaze pereinamųjų medžiagų pavidalu, kurios gali beveik visiškai slopinti RNazės aktyvumą

kita:

SDS, karbamidas, diatomitas ir kt. taip pat turi tam tikrą slopinamąjį poveikį RNazei.

Ekspertų atsiliepimai

Li Yujie vyriausiasis technikas

Jiaozhou ligoninės, Dongfang ligoninės, priklausančios Tongji universitetui, laboratorijos departamento direktorius

Siekiant užkirsti kelią egzogeninės RNazės biologiniam skilimui, RNR ekstrahavimo proceso metu reikia dažnai dėvėti kaukes, pirštines ir kepures.Visi stikliniai indai turi būti kepti džiovinimo krosnyje 200°C temperatūroje ilgiau nei 2 valandas.Kepimui naudojamas medžiagas, tokias kaip plastikas, reikia apdoroti DEPC vandeniu, o paskui nuplauti distiliuotu vandeniu.Reagentai arba prietaisai, naudojami RNR ekstrahavimui, konservavimui ir identifikavimui, turėtų būti skirti RNR ir turi būti sukurta nepriklausoma RNR veikimo zona.

nuorodos:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J ir kt.Bakterijos ir virusai nosiaryklėje prieš pat ūminių apatinių kvėpavimo takų infekcijų atsiradimą vietiniams Australijos vaikams [J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Kinijos prevencinės medicinos asociacijos ligoninių infekcijų kontrolės skyrius.Klinikinių mikrobų mėginių rinkimo ir tikrinimo gairės [J].Kinijos ligoninių infekcijos žurnalas, 2018 (20): 3192-3200.

[3] „Klinikinis tyrimas dešimt tūkstančių kodėl molekulinės biologijos bandymo tūris“