Toliau pateikiama galimų problemų analizėŽandikaulistamponas/LPS card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Valymo kolonėlė užsikimšusi

Šiame rinkinyje genominės DNR ekstrahavimo operacijos metu gryninimo kolonėlė yra tiesiogiai adsorbuojama ant mėginio fermentinės lizės mišinio be centrifugavimo etapo, o valymo kolonėlė gali būti užblokuota dėl nepilno fermentacijos ir didelio mėginio klampumo.

Toliau išvardytos galimos priežastys:

1. Neužbaigtas fermentinis audinių mėginių virškinimas.

Rekomendacija: Foregene Protease mėginio apdorojimo laikas gali būti atitinkamai pratęstas arba supernatantas gali būti paimtas po centrifugavimo 12 000 aps./min (~13 400)× g) 5 min.

2. Per didelis audinių mėginių arba didelių audinių naudojimas.

Rekomendacija: geriausia neviršyti 1Žandikaulis tamponas mėginyje;jei mėginys per didelis, atitinkamai padidinkite buferio ST1, Foregene Protease ir buferio ST2 dozę.

3. Mėginio klampumas per didelis.

Rekomendacija: prieš genominės DNR ekstrakciją mėginius galima tinkamai atskiesti 10 mM Tris-HCl.

4. Išsiurbti kraujo kortelės fragmentai.

Rekomendacija: kraujo dėmės (FTA kortelės) genomo ekstrahavimo 6 veiksmo trumpalaikis centrifugavimo laikas gali būti atitinkamai pratęstas.

Mažas derlius arba jo nėra DNR

Dažnai yra įvairių veiksnių, turinčių įtakos genomo DNR išeigai, įskaitant mėginio kilmę, mėginių laikymo sąlygas, mėginio paruošimą, manipuliavimą ir kt.

Ekstrahuojant genomo DNR gauti negalima

Galimos priežastys yra šios:

1. Netinkamas mėginių konservavimas arba per ilgas laikymas sukelia genomo DNR degradaciją.

Rekomendacija: pageidautina, kad iš burnos tamponų būtų paimti švieži mėginiai, o genominės DNR ekstrahavimo operacijoms nepatartina naudoti konservuotų tepinėlių;kraujo dėmių mėginiai turėtų užtikrinti, kad kokybė būtų kvalifikuota, o laikymo laikas neturėtų būti per ilgas.

2. Naudojant per mažai audinių, atitinkamos genomo DNR gali nepavykti išgauti.

Rekomendacija: vadovaukitėsbuccal operacijų vadove pateiktas tepinėlių mėginių ėmimo instrukcijas ir nuvalykite kuo daugiau kartų, kad prie burnos tampono būtų galima prijungti pakankamai ląstelių genomo DNR ekstrahavimui;kraujo dėmių mėginiui paimti galima atitinkamai padidinti kraujo dėmių pjovimo plotą.

3. Foregene Protease yra netinkamai konservuota, todėl sumažėja jos aktyvumas arba inaktyvuojama.

Rekomendacija: Patvirtinkite laikymo sąlygasFOregene Protease arba pakeiskite ją nauja Foregene Protease fermentinei reakcijai.

4. Netinkamas rinkinio konservavimas arba laikymo laikas yra per ilgas, todėl kai kurie rinkinio komponentai sugenda.

Rekomendacija: Pirkite naująŽandikaulis tepinėlio DNRisolation susijusių procedūrų rinkinys.

5. Buferis WB neprideda absoliutaus etanolio.

Rekomendacija: įsitikinkite, kad buferis WB prideda reikiamą absoliutaus etanolio kiekį.

6. Eliuentas netinkamai įpiltas į silikoninę plėvelę.

Rekomendacija: pridėti 65°Ciš anksto pašildytas eliuentas nukrenta iki silikoninės membranos vidurio ir paliekamas kambario temperatūroje 5 min., kad padidėtų eliuavimo efektyvumas.

Lowyeld genominė DNR izoliuotas

Toliau išvardytos galimos priežastys:

1. Netinkamas mėginių konservavimas arba per ilgas laikymas sukelia genomo DNR degradaciją.

Rekomendacija: pageidautina, kad iš burnos tamponų būtų imami švieži mėginiai, o konservuoti tamponai neturėtų būti naudojami genomo DNR ekstrakcijai.

2. Jei audinio mėginio kiekis yra per mažas, išskirtos genominės DNR kiekis bus mažesnis.

Rekomendacija: vadovaukitės naudojimo vadove pateiktomis burnos tamponų mėginių ėmimo instrukcijomis, nušluostykite kuo daugiau kartų, kad prie burnos tampono būtų galima pritvirtinti pakankamai ląstelių genomo DNR ekstrakcijai.

3. Foregene Protease yra netinkamai konservuota, todėl sumažėja jos aktyvumas arba inaktyvuojama.

Rekomendacija: Patvirtinkite laikymo sąlygasthe Foregene Protease arba pakeiskite jį nauju Foregene proteazė fermentinei reakcijai.

4. Eliuento problemos.

Rekomendacija: eliuavimui naudokite buferį EB;jei naudojate ddH₂O arba kiti eliuentai, patvirtinkite, kad eliuato pH yra 7,0–8,5.

5. Eliuatas lašinamas neteisingai.

Rekomendacija: eliuento lašelius įlašinkite į silikoninės membranos vidurį ir palikite kambario temperatūroje 5 min., kad padidintumėte eliuavimo efektyvumą.

6. Eliuavimo skysčio susikaupia per mažai.

Rekomendacija: Naudokite eliuentą genomo DNR eliuavimui, kaip reikalaujama instrukcijosene mažiau nei 15μl.

Lo grynumas of genominė DNRizoliuotas

Žemas genomo DNR grynumas gali sukelti nesėkmę arba nepatenkinamus tolesnių eksperimentų rezultatus, pavyzdžiui: fermentai negali būti iškirpti, PGR negali gauti dominančio geno fragmento ir pan.

Galimos priežastys yra šios:

1. Heteroproteinų tarša, RNR tarša.

Analizė: gryninimo kolonėlė nebuvo plaunama naudojant buferinį PW;buferio PW plovimo valymo kolonėlė nebuvo plaunama naudojant tinkamą išcentrinį greitį.

Rekomendacija: prieš pildami etanolį įsitikinkite, kad supernatante nėra nuosėdų;būtinai išplaukite valymo kolonėlę pagal instrukcijas ir šio žingsnio negalima praleisti.

2. Priemaišų jonų tarša.

Analizė: Buferio WB plovimo valymo kolonėlė buvo praleista arba plaunama tik vieną kartą, todėl liko joninis užterštumas.

Rekomendacija: Buffer WB būtinai nuplaukite 2 kartus, kaip nurodyta, kad kuo daugiau pašalintumėte likusius jonus.

3. RNR fermentų užterštumas.

Analizė: svetimos RNazės buvo pridėtos į buferį;Buferio PW plovimo operacija buvo neteisinga, todėl susidarė RNazės likučiai, kurie turėjo įtakos tolesniam RNR eksperimentinėms operacijoms, tokioms kaip in vitro transkripcija.

Rekomendacija: Foregene serijos nukleorūgštisizoliarinkiniai gali pašalinti RNR be papildomo RNazės,taigi žandinio tampono / FTA kortelės DNR izoliavimo rinkinysreikia“t pridėti RNazę;būtinai laikykitės buferio PW plovimo valymo kolonėlės instrukcijų ir šio veiksmo negalima praleisti.

4. Etanolio likutis.

Analizė: Buferis WB neatliko tuščio mėgintuvėlio centrifugavimo po valymo kolonėlės plovimo.

Rekomendacija: Atlikite teisingą tuščio mėgintuvėlio centrifugavimo operaciją pagal instrukcijas.

5. Kita tarša priemaišomis.

Analizė: išsaugoti mėginiai arba specialūs mėginiai iš anksto neapdorojami.

Rekomendacija: kruopščiai iš anksto apdorokite mėginį, kaip nurodyta.