PGR gimimas
PCR (polimerazės grandininė reakcija)
Nuo polimerazės grandininės reakcijos išradimo praėjo daugiau nei 30 metų.Daugiau nei 30 metų, po to, kai daugybė mokslininkų visame pasaulyje toliau papildo ir tobulina, PGR technologija tapo plačiausiai ir dažniausiai naudojamu bei svarbiausiu baziniu tyrimo metodu visoje gyvosios gamtos mokslų srityje.
„TouchDown PGR“, „Real-Time PGR“, „Multi PGR“ ir kt., sukurti remiantis plačiu tradicinės PGR technologijos pritaikymu, taip pat naujai atsiradusi skaitmeninė PGR (skaitmeninė PGR), labai praturtino daugumos mokslininkų tyrimo metodus ir labai paspartino šiuolaikinių gyvosios gamtos mokslų, ypač molekulinės biologijos, vystymosi procesą, įnešė didelį indėlį į visą žmogaus gyvybės ir gamtos tyrimą.
Tradicinės PGR technologijos trūkumai
Sudėtingas nukleorūgščių atskyrimas irištraukimas:
★ Tradicinė PGR technologija: būtina
★ PGR gauta technologija: būtina
★ DNR ir RNR mėginiai: dideli skirtumai, sudėtingi veikimo reikalavimai
★ Pavojai organizmui: toksiški reagentai kenkia organizmui
Tradicinė PGR technologija ir darinių technologija turi būtiną sąlygą – nukleorūgščių atskyrimą ir gryninimą
Norint gauti PGR technologijos reikalavimus atitinkančius nukleorūgščių mėginius, bet kuriam biologiniam mėginiui reikia atlikti sudėtingą ir varginantį mėginio apdorojimą.
DNR ir RNR atskyrimas ir išskyrimas visada buvo pagrindinė užduotis, kurią atitinkami mokslininkai turi kartoti kiekvieną dieną.
Dėl didžiulių skirtumų tarp mėginių labai skiriasi ir DNR bei RNR atskyrimo ir ekstrahavimo procesai.Šis darbas reikalauja aukšto lygio operatorių techninių įgūdžių.Tradiciniai atskyrimo ir ekstrahavimo būdai reikalauja ilgalaikio kontakto su kai kuriais labai toksiškais cheminiais reagentais.Tai sukels negrįžtamą žalą operatoriaus kūnui ir netgi sukels tiesioginę žalą eksperimento metu.
Tuo pačiu metu tiems, kurie turi daug tirti mėginių, nukleorūgščių atskyrimas ir ekstrahavimas yra daug darbo reikalaujanti užduotis.
Nukleino rūgščių išskyrimo ir ekstrahavimo rinkiniai rinkoje dabar yra subrendę ir yra daug prekių ženklų, tačiau jie yra maždaug tokie patys.Nesvarbu, ar tai yra silikagelio membranos kolonėlės išcentrinis rinkinys, ar magnetinių granulių metodo rinkinys, tai užima daug laiko ir yra brangu.Be komplekto kainos, laboratorinei įrangai keliami ir specialūs reikalavimai.Magnetinio karoliuko metodu naudojama automatizuota darbo vieta yra labai tipiška didelės apimties didelės vertės įranga, kuri laboratorijai yra didžiulės išlaidos.
Apibendrinant
Prieš atliekant PGR eksperimentus, išankstinis mėginių apdorojimas yra neišvengiamas ir nuolatinis tyrėjų galvos skausmas.Kaip išspręsti šią problemą ir ar galima atlikti PGR eksperimentus neatskiriant ir ekstrahuojant nukleino rūgštis, visada galvojo dauguma mokslininkų ir klinikinių laboratorijų darbuotojų.
Foregeno sprendimas
Po daugelio metų kruopštaus tiesioginio PGR technologijos ir susijusių rinkinių tyrimų, Forgene sėkmingai įveikė daugybę kliūčių ir sėkmingai pasiekė tiesioginį PGR daugelio tipų skirtingiems mėginiams, pasižymintiems dideliu atsparumu ir pritaikomumu, leidžiančiu tyrėjams atsikratyti sudėtingo ir pavojingo nukleorūgščių atskyrimo ir ekstrahavimo.Tai labai sumažins kiekvieno darbo intensyvumą, pagreitins eksperimento procesą, sutaupys mokslinių tyrimų ir bandymų išlaidas.
Forgene supratimas ir žinios apie DirectPCR
Pirma, DirectPCR technologija yra tiesioginė PGR technologija įvairiems biologinių mėginių audiniams.Esant tokioms techninėms sąlygoms, nereikia atskirti ir ekstrahuoti nukleino rūgščių, o audinio mėginys yra tiesiogiai naudojamas kaip objektas, o PGR reakcijai pridedami tikslinių genų pradmenys.
Antra, „DirectPCR“ technologija yra ne tik tradicinė DNR šablono amplifikacijos technologija, bet ir RNR šablono atvirkštinės transkripcijos PGR.
Trečia, „DirectPCR“ technologija ne tik tiesiogiai atlieka įprastas kokybines PGR reakcijas su audinių mėginiais, bet ir apima realaus laiko qPCR reakcijas, kurioms reikalinga, kad reakcijos sistema būtų stipriai atspari foninės fluorescencijos trukdžiams ir antagonizuoti endogeninius fluorescencijos gesiklius.
Ketvirta, audinių mėginiai, kuriems taikoma DirectPCR technologija, reikalauja tik nukleorūgščių šablonų atpalaidavimo ir nepašalina baltymų, polisacharidų, druskų jonų ir kt., kurie trukdo PGR reakcijai.Tam reikia, kad reakcijos sistemoje esanti nukleorūgščių polimerazė ir PGR mišinys turėtų puikų antigrįžtamumą ir prisitaikymą, taip pat gali užtikrinti fermentų aktyvumą ir replikacijos tikslumą sudėtingomis sąlygomis.
Penkta, audinių mėginiai, kuriems taikoma „DirectPCR“ technologija, nebuvo apdoroti jokiu sodrinimo nukleino rūgštimis, o šablono kiekis yra labai mažas, o tai reikalauja ypač didelio reakcijos sistemos jautrumo ir amplifikacijos efektyvumo.
Išvada
„DirectPCR“ technologija yra viena iš svarbiausių technologinių pokyčių ir naujovių per pastaruosius 30 metų nuo PGR technologijos atsiradimo.Forgene yra ir toliau bus šios technologijos pradininkė ir novatorė.
„DirectPCR“ technologijos taikymo perspektyva yra labai plati.Nuolatinis šios technologijos tobulinimas ir propagavimas neabejotinai sukels grėsmingų mokslinių tyrimų ir tikrinimo darbų pokyčių.Tai PGR technologijos revoliucija.
Paskelbimo laikas: 2017-02-21
