Sukurkite PGR eksperimento SOP, kad standartizuotų eksperimento personalo elgesį.
Eksperimento vykdytojas griežtai laikosi darbo procedūrų ir iki minimumo sumažina PGR taršą, kurią gali sukelti žmogiškieji veiksniai arba užkerta kelią taršos atsiradimui.Be to, eksperimento vykdytojas turėtų turėti atitinkamų profesinių žinių ir įgūdžių, įskaitant įgūdžius valdyti susijusią įrangą, išaiškinti visą darbo procesą, įsisavinti taršos gydymo metodus ir laboratorinės kokybės kontrolės metodus, mokėti teisingai interpretuoti tyrimų rezultatus.
Įsteigti standartinę PGR laboratoriją.
PGR laboratorija iš esmės suskirstyta į keturias sritis: reagentų paruošimo sritį, mėginių apdorojimo sritį, amplifikacijos sritį ir amplifikacijos produkto analizės sritį.Pirmosios dvi sritys yra prieš sustiprinimą, o paskutinės dvi sritys yra po stiprinimo.Prieš amplifikaciją ir po stiprinimo zonas reikia griežtai atskirti.Eksperimentinės medžiagos, reagentai, įrašymo popierius, rašikliai, valymo medžiagos ir kt. gali tekėti tik iš priešamplifikacijos srities į zoną po amplifikacijos, tai yra iš reagento paruošimo srities → mėginio apdorojimo srities → amplifikacijos srities → amplifikacijos produkto analizės srities ir neturi tekėti atgal.Oro srautas laboratorijoje taip pat turi tekėti iš priešamplifikacijos srities į zoną po stiprinimo, o ne tekėti atgal.Idealus PGR laboratorijos dizainas parodytas žemiau:
A paveikslas: Idealus PGR laboratorijos nustatymo režimas su neigiamu slėgiu buferinėje patalpoje
B paveikslas: Idealus PGR laboratorijos nustatymo režimas su teigiamu slėgiu buferinėje patalpoje
PGR laboratorijos sąrankos diagramos, pateiktos A ir B paveiksluose, turėtų būti idealesnis nustatymo režimas, o laboratorija su sąlygomis gali remtis šiuo režimu projektuojant.Įprastoms laboratorijoms rekomenduojama atskirti PGR amplifikacijos ir produkto analizės sritis, o mėginio paruošimo ir PGR amplifikacijos srityje kiek įmanoma sumažinti dangtelio atidarymą.Atminkite: produktus ir eksperimentines medžiagas produktų analizės zonoje griežtai draudžiama neštis į mėginių paruošimo ir PGR amplifikacijos zoną.
Jei laboratorija atlieka tik PGR aptikimą ir identifikavimą, vietoj įprastinės PGR rekomenduojama naudoti fluorescencinę kiekybinę PGR.
Fluorescenciniai kiekybiniai PGR aptikimo rezultatai gali būti renkami ir analizuojami fluorescenciniais signalais, todėl pasibaigus reakcijai nereikia atidaryti dangčio elektroforezei, taip išvengiama PGR produktų užteršimo, kurį sukelia reakcijos produktų nutekėjimas, kad susidarytų aerozoliai.Jei padidinsite dangtelių angų skaičių gelio elektroforezės užpildymo metu, tikėtina, kad bus užterštas aerozolis.Rekomenduojama skatinti kiekybinės PGR taikymą ir palaipsniui keisti kokybinę PGR.
PGR reakcijai naudojama UNG anti-PGR produktų užteršimo sistema.
Sistema naudoja dUTP, o ne dTTP.Po PGR reakcijos visi PGR produktai (DNR fragmentai) sujungiami su dUTP;kitame PGR reakcijos etape į sistemą pridėtas UNG fermentas prieš PGR 5 minutes inkubuojamas 37 °C temperatūroje, kuris gali specifiškai suardyti visus DNR fragmentus, kuriuose yra dUTP, ir tada atlikti PGR reakciją.Tai gali visiškai pašalinti PGR produktų sukeltą aerozolinį užterštumą.Poveikis parodytas paveikslėlyje žemiau:
Pastaba: Tiesioginei PGR serijai galite pasirinkti Foregene anti-PGR produktų užteršimo sistemos serijos produktus.Pasiūlyti
Laboratorijoms, kurios atlieka didelio masto genotipų nustatymo tyrimus, be pagrįstų laboratorijų kūrimo, primygtinai rekomenduojama naudoti UNG anti-PGR produktų užteršimo sistemą reagentams tirti.
Priminimas: naudojant šią sistemą negalima pašalinti PGR produkto užteršimo, kuris jau buvo sukeltas.Todėl UNG sistema turėtų būti naudojama atitinkamo bandymo pradžioje, o UNG sistema turėtų būti naudojama PGR amplifikacijai, kad būtų išvengta PGR produktų užteršimo Klaidingai teigiama.
Atliekant didelio masto tyrimus, tokius kaip:
Augalų lapų tiesioginis PGR rinkinys-UNG；
Plant Seed Direct PCR rinkinys-UNG；
Gyvūnų audinių tiesioginio PGR rinkinys-UNG；
Mouse Tail Direct PCR rinkinys-UNG；
Zebra Fish Direct PCR rinkinys-UNG.
Ši Foregene rinkinių serijagali ne tik greitai ir dideliu mastu atlikti PGR aptikimą, bet ir veiksmingai užkirsti kelią ir kontroliuoti PGR produkto užteršimą.
Paskelbimo laikas: 2021-03-19
