Vadovauti

Ilga nekoduojanti RNR, lncRNR yra nekoduojanti RNR, kurios ilgis didesnis nei 200 nukleotidų, paprastai tarp 200-100000 nt.lncRNR reguliuoja genų ekspresiją epigenetiniu, transkripcijos ir potranskripcijos lygiais, dalyvauja X chromosomų nutildyme, genomo įspaudime ir chromatino modifikavime, transkripcijos aktyvavime, transkripcijos trukdžiuose, branduolio transporte, ląstelių ciklo reguliavime, ląstelių diferenciacijos reguliavime ir dozės kompensavimo veiksmuose (šiuo metu su dozavimo kompensavimo procesais susijusi prevencija ir daugelis kitų su ja susijusių ligų). karštieji taškai biomedicinos srityje.

01  LncRNR tipai ir savybės

lncRNR skirstoma į daugybę tipų pagal skirtingus jos susidarymo šaltinius, kaip parodyta aukščiau esančiame paveikslėlyje.Turi šias charakteristikas:

1. lncRNR paprastai yra ilgesnės, su dinamine išraiška ir skirtingais sujungimo metodais diferenciacijos metu
2. Palyginti su koduojančiais genais, lncRNR paprastai turi žemesnį ekspresijos lygį
3. Dauguma lncRNR turi akivaizdų laiko ir erdvės ekspresijos specifiškumą audinių diferenciacijos ir vystymosi procese
4. Būdingi navikai ir kitos ligos
5. LncRNR tarpląstelinės vietos yra įvairios
6. Seka yra mažai išsaugoma, tačiau funkcija turi tam tikrą išsaugojimo laipsnį ir pan.

02 Dažnai užduodami klausimai apie LncRNA atvirkštinę transkripciją

Dėl mažo lncRNR kiekio ląstelėse, ilgo ilgio ir aukšto lygio struktūros tokia RNR dažnai turi sudėtingas struktūras, tokias kaip stiebo kilpos ar plaukų segtukai, o RT-qPCR yra linkusi į nesėkmingos atvirkštinės transkripcijos arba mažo efektyvumo problemas.

03 LncRNR atvirkštinės transkripcijos tirpalas

Centrinėje taisyklėje RNR virusų, naudojančių savo atvirkštinę transkriptazę DNR sintezei, naudojant RNR kaip šabloną, procesas vadinamas atvirkštine transkripcija.RNR viruso atvirkštinės transkriptazės panaudojimas cDNR šablonui in vitro sintetinti vadinamas atvirkštine transkripcija.Pagrindiniai elementai, įtraukti į atvirkštinės transkripcijos sistemą: RNR šablonas, atvirkštinė transkriptazė, pradmenys ir kiti komponentai.

1.RNR šablonas

RNR šablono įtaka atvirkštinei transkripcijai atsispindi jo struktūroje, grynumu ir vientisumu.Kuo didesnis ekstrahuotos RNR grynumas ir vientisumas, tuo didesnis atvirkštinės transkripcijos efektyvumas ir tikslesni kiekybiniai rezultatai.RNR, išgrynintoje dažniausiai naudojamais RNR ekstrahavimo reagentais, dažnai yra alkoholio ir guanidino druskų likučių, kurios stipriai slopina daugumą atvirkštinės transkriptazės.

2. Atvirkštinė transkriptazė

Atvirkštinė transkriptazė turi esminę įtaką visai atvirkštinės transkripcijos sistemai.Daugumoje laboratorijų tinkama atvirkštinės transkriptazės temperatūra paprastai yra 42 °C.Tiesą sakant, norint atidaryti aukšto lygio RNR struktūrą, reikia aukštesnės temperatūros, o atvirkštinės transkriptazės reikalavimai yra aukštesni.

3.Gruntas

Atvirkštinės transkripcijos pradmenys apima genų specifinius pradmenis, atsitiktinius pradmenis ir Oligo dT pradmenis.Daugumoje lncRNR nėra poliA uodegų, todėl svarbu tinkamai suderinti atsitiktinius pradmenis su Oligo dT.

4.Kiti komponentai

Atsižvelgiant į tai, kad RNR yra ypač lengva skaidyti, galima sumažinti komponentų įvedimą į atvirkštinės transkripcijos sistemą, o tai gali veiksmingai užkirsti kelią RNazės patekimui ir užtikrinti sklandų atvirkštinės transkripcijos eigą.

Fraudonėliogauna iš RNR šablono, atvirkštinę transkripciją į qPCR

Visapusiškai palydėkite savo lncRNR aptikimą

Gyvūnų bendroji RNR IpaguodaRinkinys (su gDNR pašalinimo kolonėle)

Ląstelių bendroji RNR IpaguodaRinkinys (su gDNR pašalinimo kolonėle)

Lnc-RT HeroTM I (su gDNaze) (Super Premiksas, skirtas pirmosios krypties cDNR sintezei iš lncRNR)

Realaus laiko PCR EasyTM-SYBR Green I

Aprivalumai ofRNR ekstrahavimas:

Rinkinyje naudojama trečios kartos RNR ekstrahavimo technologija, nereikia naudoti DNazės.

11 minučių iš 96, 24, 12 ir 6 šulinėlių plokštelėse kultivuotų ląstelių, didelio našumo gDNR neturinčios, labai grynos aukštos kokybės bendros ląstelių RNR ekstrahavimas.

LncRNR atvirkštinės transkripcijos pranašumai:

Atvirkštinės transkripcijos sistema, specialiai sukurta LncRNR, siekiant greitai pašalinti genomo DNR užterštumą.

Atvirkštinės transkripcijos sistema pasižymi dideliu terminiu stabilumu ir vis dar turi gerą atvirkštinės transkripcijos našumą 50 ° C temperatūroje.

Šablonai su dideliu GC kiekiu ir sudėtinga antrine struktūra gali būti apverčiami labai efektyviai.

Privalumaiof qPGR:

Karšto paleidimo Foregene Taq polimerazė turi didesnį stiprinimo efektyvumą, didesnį stiprinimo jautrumą ir didesnį stiprinimo specifiškumą

Dėl optimizuoto „Real PCR Easy Mix“ SYBR Green I aptikimo jautrumas yra didesnis, o jo fluorescencijos intensyvumas yra 3–5 kartus didesnis nei panašių produktų, kurie gali patenkinti įvairių tipų fluorescencijos kiekybinių eksperimentų poreikius.