Kiek tu žinai

Apie Nukleino rūgšties ekstrahavimas

Išgrynintos nukleino rūgšties pradžia ir pabaiga

Pradžioje viskas sunku, daugiausiai išgrynintos nukleino rūgšties

Molekulinių eksperimentų inicijavimas tolesniems eksperimentams

Sėkmė ar nesėkmė turi lemiamą įtaką.

Trace/ultra-trace UV spektrofotometras yra mėgstamas daugelio mokslininkų, nes jis gali paprastai, greitai ir ekonomiškai aptikti nukleorūgščių koncentraciją ir baltymų bei druskų jonų likučius.

Kaip visi žinome, A260 reiškia nukleorūgščių absorbcijos OD vertę, A280 reiškia baltymų koncentracijos absorbcijos OD vertę, A230 reiškia druskos jonų koncentracijos absorbcijos OD vertę, todėl A260 gali konvertuoti nukleino rūgšties koncentraciją, A260/280 reiškia baltymų likučius, A260/230 reiškia druskos jonų likučius, tačiau tai yra tik daugybės matavimų rezultatai, kuriuos atrado taisykle.sutartinis“ manyti, kad tai gali paaiškinti DNR ir RNR grynumątam tikru mastu.Tai nėra vienintelis nukleorūgščių išeigos ir grynumo identifikavimo standartas, jis naudojamas tik kaip nuoroda ir nėra „auksinis standartas“.

Thermo Fisher ND-2000 vadovas pabrėžia bandymo rezultatų patikimumą

Priežastis ta, kad naudojant mikro/ultramikro UV spektrofotometrą gauti rezultatai atspindi tik nukleino rūgšties išeigą ir grynumą iš šono, o įtakos turi daug veiksnių (optinis kelias, mėginio tūris, mėginio koncentracija, pH vertė, kiti jonai, turintys įtakos absorbcijos matavimui ir kt.), išmatuota OD reikšmė nebūtinai yra tiksli.Tuo pačiu metu dėl absorbcijos vertės nustatymo medžiagos specifiškumo stokos viengrandė DNR, dvigrandė DNR, RNR, dNTP ir kai kurie baltymai turi absorbcijos smailes esant 260 nm bangos ilgiui, o vien A260 nustatyta koncentracija nebūtinai yra tikroji DNR ar RNR.Koncentracija, jos vientisumas ir degradacija negali būti vertinama.

Taigi, kaip įvertinti mūsų išgrynintos nukleino rūgšties kokybę?Be to, kad aptikimui naudojamas mikro/ultramikro UV spektrofotometras, taip pat reikalingi metodai, tokie kaip agarozės gelio elektroforezė, kad būtų galima vizualiai parodyti nukleorūgšties grynumą ir vientisumą bei nurodyti tam tikrą koncentraciją.Tokiu būdu nukleino rūgščių išeiga ir grynumas, gauti iš įvairių metodų aptikimo rezultatų, yra patikimi.

Eksperimentinės diagramos palyginimas

H1299 ląstelių genominė DNR buvo išskirta naudojant įmonės A DNR ekstrahavimo rinkinius ir buvo pastebėtas didelis užteršimas priemaišomis, dėl kurių buvo didelės OD vertės.

(OD matavimo vertė ir atitinkama elektroferograma)

Vertinimo indeksas

Ar yra „auksinis standartas“ nukleorūgščių išeigos ir kokybės tyrimams?

Kiek žinome, paprasto, greito ir pigaus metodo nėra.Nesvarbu, ar tai yra spektrofotometras, gelio elektroforezė, ar masės spektrometrija, jie visi skirtingais aspektais atspindi nukleino rūgšties koncentraciją ir grynumą tirpale, todėl juos reikia vertinti remiantis vieni kitais.

Geriausias vertinimo indeksas visada yratolesnis eksperimentinis taikymas.Tai neturi įtakos atvirkštinės transkripcijos ir PGR amplifikacijos efektyvumui.Patikimų amplifikacijos produktų ir Ct verčių gavimas ir visos sekos gavimas sekvenavimo būdu yra sėkmingas nukleino rūgšties ekstrahavimas.

Apibendrinant galima teigti, kad tik santykio teorijos požiūriui turėtų būti užginčytas požiūris „gerų tolesnių eksperimentinių rezultatų naudojimas kaip geri gavybos parametrai“!

Rekomenduojami Foregene DNR RNR ekstrahavimo rinkiniai, norint gauti aukštą DNR/RNR grynumą:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/