Laboratoriniai tyrimai prasideda nuo mėginių paėmimo, o mėginių paėmimą lengviausia nepastebėti.Imant mėginius svarbiausia pasirinkti tinkamą mėginio rūšį, naudoti tinkamas mėginių ėmimo priemones, tinkamai transportuoti ir apdoroti.

I.Pavyzdžio tipas

Įprasti pavyzdžių tipai yra šie:

Mėginių ėmimo metodas gali būti susijęs su naujojo koronaviruso aplinkos stebėsenos žemės ūkio prekybos (turgaus) rinkoje techninėmis specifikacijomis“:

1. Tamponų mėginiai iš gerklės tamponų, rankų, drabužių ir kitų praktikuojančių objektų: būtina naudoti virusų konservavimo tirpalą viruso mėginių ėmimo vamzdelyje ir visiškai infiltruoti mėginio ėmimo vatos tamponėlius.Žemės paviršius) pakartotinai užtepamas ir skalaujamas daugiau nei 3 kartus.Tuo pačiu metu reikia atlikti daugiataškį paskirstytą mėginių ėmimą imamo objekto paviršiuje.

2. Maisto paviršiaus tamponų mėginiai: Maisto mėginių negalima imti tiesiogiai.Prieš imant tamponų mėginius, renkamas maistas turi būti kruopščiai atskirtas ir laikomas švariame mėginių ėmimo maišelyje.Virusų ėmimo mėgintuvėlyje būtina naudoti virusų konservavimo tirpalą, visiškai sumirkius mėginio ėmimo vatos tamponą, pakartotinai sutepti ir nuplauti renkamo maisto mėginio paviršių daugiau nei 3 kartus.Tuo pačiu metu mėginio paviršiuje būtina atlikti daugiataškį paskirstytą mėginių ėmimą.

3. Nuotekų mėginiai: atsižvelgdami į drenažo sistemos pasiskirstymą rinkoje, pasirinkite 2-3 nuotekų mėginių ėmimo vietas, daugiausia dėmesio skiriant vidinio vamzdyno tinklo surinkimui, vandens tekėjimo krypties pasroviui arba prijungimui su komunalinių vamzdžių tinklu.Norėdami paimti tampono mėginį, panardinkite jį į kanalizaciją su mėginių ėmimo vatos tamponu, kad jis adsorbuotų nuotekas, ir išskalaukite mėginių ėmimo vamzdelyje daugiau nei 3 kartus.Nuotekų mėginiams paimti naudokite polietileninius plastikinius butelius 30-500 mL nuotekų vandens mėginiams surinkti;nuotekoms, kurių tūris didesnis nei 500 ml, surinkti galima naudoti polietileno plastikinius kibirus arba vietoje vandens mėginių ėmimo specialią sodrinimo įrangą.Tuo pačiu metu nuotekų mėginių ėmimo vietoje būtina atlikti paskirstytą mėginių ėmimą iš kelių taškų.

4. Gyvūnų mėginiai: iš gyvų gyvūnų mėginių ėmimo tepinėliai gali būti naudojami kūno paviršiaus tepinėlių, burnos ir ryklės tepinėlių ir išangės tepinėlių paėmimui, o ekskrementų ar sekreto mėginiai taip pat gali būti renkami ir atitinkamai įrašomi į registracijos lapą.Gyvūnų mėginiams, kurie buvo nulupami ir pan., naudokite medvilninius tamponus, kad paimtumėte jų kūno paviršiaus ir kūno ertmės tamponų mėginius.Būtina naudoti viruso konservavimo tirpalą viruso mėginių ėmimo vamzdelyje, kad jis visiškai įsiskverbtų į mėginio ėmimo vatos tamponą, o tada pakartotinai užtepkite renkamo maisto mėginio paviršių.Shabu daugiau nei 3 kartus.Tuo pačiu metu mėginio paviršiuje būtina atlikti daugiataškį paskirstytą mėginių ėmimą.

5. Kiti prietaisai: konteineriai gyvūnams vežti ir veisti, pavyzdžiui, narvai arba žuvų rezervuarai.Pirmiausia stebėkite arba supraskite konkrečias konteineryje laikomų ir veisiamų gyvūnų rūšis ir paimkite tepinėlių mėginius ant vidinės talpyklos sienelės arba skystus turinio mėginius.

6.Rinkti aerozolių mėginius žmonių susibūrimo vietose, prastai vėdinamose vietinėse prekybos vietose, biuruose ir poilsio kambariuose.

II. Mėginių ėmimo įrankiai
1. Kraujo paėmimo vamzdelis
Jei vėliau reikės atlikti nukleorūgščių tyrimą ir antikoaguliantų mėginius, kraujui paimti rekomenduojama naudoti vakuuminę kraujagyslę, kurioje yra EDTA antikoaguliantų;serumo mėginiams rekomenduojama naudoti vakuuminę kraujagyslę be antikoagulianto.

2. Mėginių ėmimo tamponas

Rekomenduojama naudoti polipropileninius tamponus, o ne kalcio alginato tamponus arba tamponus su mediniais pagaliais, nes juose gali būti medžiagų, kurios inaktyvuoja tam tikrus virusus ir slopina PGR tyrimą.Tamponų su vatos galvutėmis naudoti negalima, nes medvilnės pluoštai turi stiprią baltymų adsorbciją ir nėra lengvai išplaunami į tolesnį konservavimo tirpalą.

„10 viename mišraus naujų koronaviruso nukleorūgščių surinkimo ir aptikimo techninėse specifikacijose“ aiškiai nurodyta, kad „ėminių tamponas turi būti pagamintas iš poliesterio, nailono ir kitų ne medvilnės ir ne kalcio alginato medžiagų, o rankena – iš ne medienos.Lūžio taškas yra apie 3 cm nuo tampono galvutės viršaus, kurią lengva sulaužyti.

JAV CDC taip pat paminėjo: „Naudokite tik sintetinio pluošto tamponus su plastikiniais arba vieliniais kotais.Nenaudokite kalcio alginato tamponų arba tamponų su mediniais kotais,nes juose gali būti medžiagų, kurios inaktyvuoja kai kuriuos virusus ir slopina PGR tyrimus.

Šiuo metu plačiai naudojamas vienkartinis sterilus nailono tamponas, sujungtas su plastikine lazdele.Blokuojantis tamponas geriau sugeria vandenį ir išskiria vandenį.Atsižvelgiant į skirtingas mėginių ėmimo vietas, tampono galvutė taip pat yra skirtingų dydžių ir pluoštų.Storis.“

3. Transportavimo konservavimo sprendimo pavyzdys

Viruso inaktyvavimo konservavimo tirpalas: tinkamas guanidino druskos koncentracijos kiekis ir įvairūs viruso lizės komponentai gali tiesiogiai lizuoti virusą, kad išsiskirtų nukleino rūgštis, inaktyvuotų RNazę ir DNazę bei užtikrintų nukleino rūgšties vientisumą, kuris gali būti naudojamas vėlesniam qPCR aptikimui.Jis negali būti naudojamas virusų auginimui ir izoliavimui.

Viruso transportavimo ir konservavimo tirpalas: turi druskų, amino rūgščių, vitaminų, gliukozės ir viruso išlikimui reikalingų baltymų, kurie gali palaikyti viruso aktyvumą.Jis gali būti naudojamas nukleino rūgščių ekstrakcijai ir viruso aptikimui ateityje, taip pat gali būti naudojamas viruso auginimui ir atskyrimui.

4. Mėginio konservavimo mėgintuvėlis ir mėginių maišelis

Mėginio laikymo mėgintuvėlis turi būti sterilus plastikinis mėgintuvėlis su užsukamu dangteliu, kuris neadsorbuoja nukleino rūgšties.Kiekvienas mėginio mėgintuvėlis turi būti uždengtas mėginio maišeliu, kad būtų išvengta nuotėkio ir mėginio užteršimo.

III.Trukdančios medžiagos mėginyje

Trikdančios medžiagos PGR eksperimentuose

1. endogeninis trukdis

Kūno mėginyje esančios medžiagos gali trukdyti aptikti kitas medžiagas.

Kraujas:hemas (>1mg/ml), heminas (>0,1ng/μl), trigliceridai, IgG ir kt.;

Šlapimas:Karbamidas (20 mM);

Išmatos:augaliniai polisacharidai, cholatas;

Audinys:proteazė, kolagenas;

Pienas: proteazė, kalcio jonai;

Narkotikai: antibiotikai, antivirusiniai vaistai, hormonai ir kt.

kitas.

2. egzogeninis trukdis

Jis gaunamas iš medžiagų, kurios gali trukdyti aptikti kitas medžiagas in vitro.Mėginių priedai ir medžiagos, su kuriomis galima liestis imant ir apdorojant mėginius:

Bandymo reikmenys: serumo atskyrimo gelis, mėginių surinkimo talpykla ir guminis kamštis, kateteris, kateterio praplovimo skystis, pirštinių milteliai ir kt.

Antikoaguliantas: heparinas (>0,1 U/mL), EDTA (>0,5 mM) ir kt.;

Organiniai tirpikliai: izopropanolis (>0,1 IU/ml), betainas, dimetilsulfoksidas, formamidas, glicerinas, PEG ir kt.;

Dezinfekavimo priemonės: alkoholiai (etanolis>1%), aldehidai, fenoliai (fenolis>0,2%), peroksidai, stiprios rūgštys (HCL), stiprūs šarmai (NaOH) ir kt.;

Ploviklis:SDS (>0,005%);

Dirvožemis: Humusas

Dažiklis: Indigo

kitas.

Esant tikrosioms lauko mėginių ėmimo sąlygoms, pvz., renkant aplinkos mėginius, mėginiuose gali būti įvairių trukdančių medžiagų, o trukdančių medžiagų sudėtis kiekvienoje vietoje yra skirtinga, todėl PGR trukdžių eksperimentus reikia atlikti atsižvelgiant į vietos sąlygas.

IV.Mėginių laikymo ir transportavimo sąlygos

Šviežiai paimti klinikiniai mėginiai turi būti išsiųsti į laboratoriją per 2–4 valandas po paėmimo 2–8 °C temperatūroje.Laikyti 4 ℃ temperatūroje per 24 val.Mėginiai, naudojami viruso išskyrimui ir nukleino rūgščių aptikimui, turi būti ištirti kuo greičiau.Mėginius, kuriuos galima ištirti per 24 valandas, galima laikyti 4°C temperatūroje;mėginiai, kurių negalima aptikti per 24 valandas, turi būti laikomi -70°C arba žemesnėje temperatūroje (jei ne- Laikyti 70°C temperatūroje šaldytuve, -20°C temperatūroje).

Santrauka:Standartizuotas mėginių paėmimas, transportavimas ir saugojimas yra būtini vėlesniam tyrimui.Daugelio laboratorinių tyrimų klaidingai neigiami rezultatai atsiranda dėl netinkamo mėginių paėmimo, gabenimo ir laikymo, dėl kurio suyra virusinė nukleorūgštis.Tačiau daugelis laboratorijų vis dar ignoruoja mėginių ėmimo svarbą.Tikiuosi, kad šis straipsnis gali atkreipti visų dėmesį į mėginių ėmimą ir padaryti moksliškesnį bei pagrįstesnį atranką!

Susijęs produktas:

SARS-CoV-2 varianto nukleorūgščių aptikimo rinkinys (I) (daugiasluoksnis PGR fluorescencinio zondo metodas) – skirtas mutantams iš Brazilijos, Pietų Afrikos ir JK aptikti