Antikūnai, dar vadinami imunoglobulinais (Ig), yra glikoproteinai, kurie specifiškai jungiasi su antigenais.
 
Įprastas antikūnų preparatas gaminamas imunizuojant gyvūnus ir renkant antiserumą.Todėl antiserumas paprastai turi antikūnų prieš kitus nesusijusius antigenus ir kitus serumo baltyminius komponentus.Bendrosiose antigeno molekulėse dažniausiai yra keli skirtingi epitopai, todėl įprasti antikūnai taip pat yra antikūnų prieš kelis skirtingus epitopus mišinys.Net įprasti serumo antikūnai, nukreipti prieš tą patį epitopą, vis dar susideda iš nevienalyčių antikūnų, kuriuos gamina skirtingi B ląstelių klonai.Todėl įprasti serumo antikūnai dar vadinami polikloniniais antikūnais arba trumpiau – polikloniniais antikūnais.
 
Monokloninis antikūnas (monokloninis antikūnas) yra labai vienodas antikūnas, kurį gamina vienas B ląstelės klonas ir nukreiptas tik prieš konkretų epitopą.Paprastai jis ruošiamas hibridomos technologija – hibridomos antikūnų technologija pagrįsta ląstelių suliejimo technologija, sujungiančia B ląsteles su galimybe išskirti specifinius antikūnus ir mielomos ląsteles, turinčias neribotą augimo pajėgumą, į B ląstelių hibridomas.Ši hibridomos ląstelė turi pirminės ląstelės savybes.Jis gali daugintis neribotą laiką ir nemirtinai in vitro kaip mielomos ląstelės, taip pat gali sintetinti ir išskirti specifinius antikūnus, tokius kaip blužnies limfocitai.Klonuojant galima gauti monokloninę liniją, gautą iš vienos hibridomos ląstelės, ty hibridomos ląstelių liniją.Jo gaminami antikūnai yra labai homogeniški antikūnai prieš tą patį antigeninį determinantą, ty monokloninius antikūnus.
 
Antikūnai egzistuoja kaip vienas ar keli Y formos monomerai (ty monokloniniai antikūnai arba polikloniniai antikūnai).Kiekvienas Y formos monomeras susideda iš 4 polipeptidinių grandinių, įskaitant dvi identiškas sunkiąsias grandines ir dvi identiškas lengvąsias grandines.Lengvosios ir sunkiosios grandinės yra pavadintos pagal jų molekulinę masę.Y formos struktūros viršus yra kintamoji sritis, kuri yra antigeno surišimo vieta.(Ištrauka iš Detai bio-monokloninių antikūnų koncepcijos)
 
Antikūnų struktūra
Sunki grandinė
Yra penkių rūšių žinduolių Ig sunkiosios grandinės, pavadintos graikiškomis raidėmis α, δ, ε, γ ir μ.Atitinkami antikūnai vadinami IgA, IgD, IgE, IgG ir IgM.Skirtingos sunkiosios grandinės skiriasi dydžiu ir sudėtimi.α ir γ yra maždaug 450 aminorūgščių, o μ ir ε yra maždaug 550 aminorūgščių.
Kiekviena sunkioji grandinė turi dvi sritis: pastoviąją ir kintamąją.Visi to paties tipo antikūnai turi tą pačią pastovią sritį, tačiau yra skirtumų tarp skirtingų tipų antikūnų.Sunkiųjų grandinių γ, α ir δ pastovios sritys susideda iš trijų Ig domenų kartu su vyrių sritimi, kad padidintų jos lankstumą;sunkiųjų grandinių μ ir ε pastovios sritys susideda iš 4 Ig domenų.Skirtingų B ląstelių gaminamo antikūno sunkiosios grandinės kintamoji sritis yra skirtinga, tačiau tos pačios B ląstelės ar ląstelės klono gaminamo antikūno kintamoji sritis yra tokia pati, o kiekvienos sunkiosios grandinės kintamoji sritis yra apie 110 aminorūgščių ilgio., Ir sudaro vieną Ig domeną.
 
Šviesos grandinėlė
Žinduolių lengvosios grandinės yra tik dviejų tipų: lambda tipo ir kappa tipo.Kiekviena lengvoji grandinė turi du susietus domenus: pastoviąją ir kintamąją sritį.Lengvosios grandinės ilgis yra apie 211–217 aminorūgščių.Dvi lengvosios grandinės, esančios kiekviename antikūne, visada yra vienodos.Žinduolių lengvoji grandinė kiekviename antikūne turi tik vieną tipą: kappa arba lambda.Kai kuriuose žemesniuose stuburiniuose gyvūnuose, pavyzdžiui, kremzlinėse žuvyse (kremzlinėse žuvyse) ir kaulinėse žuvyse, taip pat yra kitų tipų lengvųjų grandinių, tokių kaip iota (iota).
 
Fab ir Fc segmentai
Fc segmentas gali būti tiesiogiai derinamas su fermentais arba fluorescenciniais dažais, kad būtų pažymėti antikūnai.Tai dalis, kurioje antikūnas prikimba prie plokštelės ELISA proceso metu, taip pat yra dalis, kurioje antrasis antikūnas atpažįstamas ir surišamas imunoprecipitacijos, imunoblotingo ir imunohistochemijos metu.Antikūnai gali būti hidrolizuoti į du F(ab) segmentus ir vieną Fc segmentą naudojant proteolitinius fermentus, tokius kaip papainas, arba jie gali būti suskaidyti iš vyrių srities pepsinu ir hidrolizuoti į vieną F(ab)2 segmentą ir vieną Fc segmentą.IgG antikūnų fragmentai kartais yra labai naudingi.Dėl Fc segmento trūkumo F(ab) segmentas nenusėda su antigenu ir jo neužfiksuos imuninės ląstelės atliekant tyrimus in vivo.Dėl mažų molekulinių fragmentų ir kryžminio susiejimo funkcijos trūkumo (dėl Fc segmento trūkumo) Fab segmentas dažniausiai naudojamas radioaktyviam žymėjimui atliekant funkcinius tyrimus, o Fc segmentas daugiausia naudojamas kaip blokuojantis agentas atliekant histocheminį dažymą.
 
Kintamieji ir pastovūs regionai
Kintamoji sritis (V sritis) yra 1/5 arba 1/4 (turi apie 118 aminorūgščių liekanų) H grandinės netoli N-galo ir 1/2 (turi apie 108-111 aminorūgščių liekanų) netoli L grandinės N-galo.Kiekviena V sritis turi peptidinį žiedą, sudarytą iš grandinės viduje esančių disulfidinių ryšių, ir kiekviename peptidiniame žiede yra maždaug nuo 67 iki 75 aminorūgščių liekanų.Aminorūgščių sudėtis ir išsidėstymas V srityje lemia antikūno antigeno surišimo specifiškumą.Dėl nuolat kintančių aminorūgščių tipų ir sekos V regione gali susidaryti daug rūšių antikūnų, turinčių skirtingą surišimo antigeno specifiškumą.L grandinės ir H grandinės V sritys vadinamos atitinkamai VL ir VH.VL ir VH kai kurių vietinių regionų aminorūgščių sudėtis ir seka skiriasi labiau.Šios sritys vadinamos hiperkintamaisiais regionais (HVR).Aminorūgščių sudėtis ir ne HVR dalių išsidėstymas V srityje yra santykinai konservatyvus, kuris vadinamas karkaso sritimi.VL yra trys hiperkintamos sritys, paprastai esančios atitinkamai 24–34 ir 89–97 aminorūgščių liekanose.Trys VL ir VH HVR vadinami atitinkamai HVR1, HVR2 ir HVR3.Rentgeno kristalų difrakcijos tyrimai ir analizė įrodė, kad hiperkintamoji sritis iš tiesų yra ta vieta, kur jungiasi antikūno antigenas, todėl ji vadinama komplementarumą lemiančia sritimi (CDR).VL ir VH HVR1, HVR2 ir HVR3 gali būti vadinami atitinkamai CDR1, CDR2 ir CDR3.Paprastai CDR3 turi didesnį hiperkintamumo laipsnį.Hiperkintamoji sritis taip pat yra pagrindinė vieta, kur egzistuoja idiotipiniai Ig molekulių determinantai.Daugeliu atvejų H grandinė vaidina svarbesnį vaidmenį prisijungiant prie antigeno.
Pastovi sritis (C sritis)yra 3/4 arba 4/5 (maždaug nuo 119 aminorūgšties iki C galo) H grandinės netoli C galo ir 1/2 (turi apie 105 aminorūgščių liekanas) netoli L grandinės C galo.Kiekvienoje funkcinėje H grandinės dalyje yra apie 110 aminorūgščių liekanų ir peptido žiedas, sudarytas iš 50–60 aminorūgščių liekanų, sujungtų disulfidiniais ryšiais.Šios srities aminorūgščių sudėtis ir išsidėstymas yra santykinai pastovūs toje pačioje gyvūno Ig izotipo L grandinėje ir toje pačioje H tipo grandinėje.Tas pats, jis gali tik specifiškai prisijungti prie atitinkamo antigeno, tačiau jo C srities struktūra yra tokia pati, tai yra, ji turi tą patį antigeniškumą.Arklio anti-žmogaus IgG antrinis antikūnas (arba anti-antikūnas) gali būti derinamas su dviem. Atsiranda antikūnų (IgG) derinys prieš skirtingus egzotoksinus.Tai yra svarbus pagrindas ruošiant antrinius antikūnus ir naudojant fluoresceiną, izotopus, fermentus ir kitus pažymėtus antikūnus.
 
 
Susiję produktai:
Cell Direct RT-qPCR rinkinys