Cell Direct RT qPCR rinkinys – SYBR GREEN I tiesioginio ląstelių lizės ląstelėms paruošti vieno žingsnio qRT-PCR rinkiniai
Aprašymai
Šiame rinkinyje naudojama unikali lizės buferio sistema, kuri gali greitai atpalaiduoti RNR iš kultivuotų ląstelių mėginių RT-qPCR reakcijoms, taip pašalinant daug laiko reikalaujantį ir daug pastangų reikalaujantį RNR valymo procesą.RNR šabloną galima gauti vos per 7 minutes.5×Tiesioginis RT Mix ir 2×Komplekte esantys tiesioginiai qPCR Mix-SYBR reagentai gali greitai ir efektyviai gauti kiekybinius PGR rezultatus realiuoju laiku.
5×Tiesioginis RT Mix ir 2ׄDirect qPCR Mix-SYBR“ turi stiprią inhibitorių toleranciją, o mėginių lizatas gali būti tiesiogiai naudojamas kaip RT-qPCR šablonas.Šiame rinkinyje yra unikali RNR didelio afiniteto Foregene atvirkštinė transkriptazė ir Hot D-Taq DNR polimerazė, dNTP, MgCl.2, reakcijos buferis, PGR optimizatorius ir stabilizatorius.
Specifikacijos
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Komplekto komponentai
| I dalis | Buferis CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Buferis ST | |
| II dalis | DNR trintukas |
| 5 × tiesioginis RT mišinys | |
| 2 × Tiesioginis qPCR Mix-SYBR | |
| 50× ROX etaloninis dažiklis | |
| Be RNazės ddH2O | |
| Instrukcijos | |
Savybės ir privalumai
■Paprasta ir efektyvu: naudojant „Cell Direct RT“ technologiją, RNR mėginius galima gauti vos per 7 minutes.
■ Mėginio poreikis mažas, galima ištirti net 10 langelių.
■ Didelis pralaidumas: jis gali greitai aptikti RNR ląstelėse, kultivuotose 384, 96, 24, 12, 6 šulinėlių plokštelėse.
■ DNA Eraser gali greitai pašalinti išlaisvintus genomus, labai sumažinti poveikį tolesniems eksperimentų rezultatams.
■ Dėl optimizuotos RT ir qPCR sistemos dviejų pakopų RT-PGR atvirkštinė transkripcija tampa efektyvesnė, o PGR specifiškesnė ir atsparesnė RT-qPCR reakcijos inhibitoriams.
Komplekto taikymas
Taikymo sritis: kultivuojamos ląstelės.
- RNR, išsiskirianti lizuojant mėginį: taikoma tik šio rinkinio RT-qPCR šablonui.
- Rinkinį galima naudoti šiems tikslams: genų ekspresijos analizei, siRNR sukelto genų slopinimo efekto patikrinimui, vaistų patikrai ir kt.
Diagrama
Sandėliavimas ir galiojimo laikas
Šio rinkinio I dalis turėtų būti laikoma 4 ℃ temperatūroje;II dalis turėtų būti laikoma -20 ℃ temperatūroje.
Foregene Protease Plus II reikia laikyti 4℃, neužšaldykite esant -20 ℃.
2 reagentas×Tiesioginis qPCR Mix-SYBR turėtų būti laikomas -20 temperatūroje℃tamsoje;jei naudojamas dažnai, jis taip pat gali būti laikomas 4℃ trumpalaikiam saugojimui (sunaudoti per 10 dienų).
Realaus laiko PGR pradmenų projektavimo principai
Priekinis gruntas ir atvirkštinis gruntas
Realaus laiko PGR atveju pradmenų dizainas yra labai svarbus.Pradmenys yra susiję su PGR amplifikacijos specifiškumu ir efektyvumu ir gali būti sukurti remiantis šiais principais:
Grunto ilgis: 18-30bp.
GC kiekis: 40-60%.
Tm reikšmė: Grunto projektavimo programinė įranga, pvz., Primer 5, gali pateikti grunto Tm vertę.Prieš srovę ir pasroviui esančių pradmenų Tm vertės turi būti kuo artimesnės.Taip pat galima naudoti Tm skaičiavimo formulę: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Atliekant PGR, kaip atkaitinimo temperatūra paprastai pasirenkama žemesnė už pradmenų Tm reikšmę 5 °C temperatūra (atitinkamas atkaitinimo temperatūros padidėjimas gali padidinti PGR reakcijos specifiškumą).
Gruntai ir PGR produktai:
Dizaino pradmenų PGR amplifikacijos produkto ilgis pageidautina 100-150 bp.
Reikėtų kiek įmanoma vengti dizaino gruntų antrinėje struktūrinėje šablono srityje.
Venkite 2 ar daugiau vienas kitą papildančių bazių susidarymo tarp prieš srovę ir pasroviui esančių pradmenų 3′ galų.
Grunto 3′ gnybtų pagrindo negali būti su 3 papildomais iš eilės G arba C.
Patys pradmenys negali turėti papildomų struktūrų, kitaip susiformuos plaukų segtuko struktūra, turinti įtakos PGR amplifikacijai.
ATCG turėtų būti paskirstytas kiek įmanoma tolygiau pradmenų sekoje, o 3′ galinės bazės turėtų būti vengiama kaip T.
1 priedas: „Cell Direct RT-qPCR Kit“ komponentų priedų paketas
1.Ląstelių lizės tirpalas
|
| |||
| Komplekto komponentai (24 šulinėlių lizės sistema / šulinys) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| dalisaš | Buferis CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buferis ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| dalisII | DNR trintukas | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Mišinys
|
| |
| Komplekto komponentai (20 μl reakcijos sistema) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × tiesioginis RT mišinys | 800 μl |
| DdH be RNazių2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Komplekto komponentai (20 μl reakcijos sistema) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2 × Tiesioginis qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× ROX etaloninis dažiklis | 40 μl | 200 μl |
| DdH be RNazių2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instrukcijų vadovai:
