Animal Tissue Direct PCR rinkinys-UNG (be mėginių ėmimo įrankių) protokolas
Komplekto aprašymas:
Tiesiogiai naudokite gyvūnų audinių lizatą kaip šabloną PGR amplifikacijai, be atskiro DNR ekstrahavimo, greitas ir didelis jautrumas.Pridėta UNG apsaugos nuo taršos sistema, siekiant pašalinti klaidingus teigiamus rezultatus.
◮Nereikia daug laiko reikalaujančio ir brangaus DNR valymo.
◮Mėginio paklausa nedidelė, paimkite tik vieną sėklą.
◮Nereikia jokių specialių apdorojimo priemonių, tokių kaip šlifavimas ir smulkinimas, o operacija paprasta.
◮Optimizuota PGR sistema leidžia PGR turėti didesnį specifiškumą ir stipresnę toleranciją PGR reakcijos inhibitoriams.
Aprašymai
Šiame rinkinyje naudojama unikali lizės buferio sistema, leidžianti greitai išlaisvinti genominę DNR iš gyvūnų audinių mėginių PGR reakcijoms, todėl jis ypač tinkamas didelio masto genetiniams tyrimams.
Genominės DNR atpalaidavimo iš lizės buferio procesas baigiamas per 10-30 minučių 65 °C temperatūroje.Jokių kitų procesų, tokių kaip baltymų ir RNR pašalinimas, nereikia, o išleista DNR pėdsakas gali būti naudojamas kaip PGR reakcijos šablonas.
2 × PCR lengvasTMMix (UNG) naudoja dUTP, o ne dTTP, remiantis 2×PCR EasyTMSumaišykite ir prideda UNG fermento (Uracil-N-glikozilazės), kuris tuo pačiu metu gali suardyti šabloną, kuriame yra dUTP.Prieš PGR reakciją UNG fermentas naudojamas PGR produktui, kuriame yra uracilo, skaidyti.UNG fermentas neturės jokio poveikio šablonui, kuriame nėra uracilo, taip užtikrinant amplifikacijos specifiškumą ir tikslumą bei užkertant kelią PGR produktų užteršimo galimybėms atliekant didelio masto genetinius tyrimus.
D-Taq DNR polimerazė yra DNR polimerazė, specialiai sukurta Foregene tiesioginėms PGR reakcijoms.D-Taq DNR polimerazė stipriai toleruoja įvairius PGR reakcijos inhibitorius ir gali efektyviai amplifikuoti nedidelius DNR kiekius įvairiose sudėtingose reakcijos sistemose, o amplifikacijos greitis gali siekti 2Kb/min, o tai ypač tinka tiesioginei PGR reakcijai.
Komplekto komponentai
| I dalis | Buferis AL |
| Foregene proteazė | |
| 6 × DNR įkėlimo buferis | |
| II dalis | 2 × PCR lengvasTMMišinys (UNG) |
Savybės ir privalumai
■Jokio daug laiko reikalaujančio ir brangaus DNR valymo
■ Mėginių poreikis nedidelis, galima ištirti tik 5 mg gyvūnų audinių.
■ Nereikia jokio specialaus apdorojimo, pvz., šlifavimo ir smulkinimo, o operacija paprasta.
■ Dėl optimizuotos PGR sistemos PGR yra specifiškesnis ir atsparesnis PGR reakcijos inhibitoriams.
■ Apsaugos nuo taršos PGR sistema 2×Lengvas PGRTMMišinys (UNG) efektyviai pašalina PGR produktų sukeliamą taršą ir užtikrina stiprinimo specifiškumą bei tikslumą.
Komplekto parametrai
Naudojimas: įvairūs gyvūnų audiniai.
DNR, išsiskirianti po mėginio lizės: naudojama tik kaip PGR šablonas.
Rinkinys gali būti naudojamas šiems tikslams: transgenozės identifikavimui, gyvūnų genotipų nustatymui ir kt.
Darbo eiga
Sandėliavimas ir galiojimo laikas
Šio rinkinio I dalis turėtų būti laikoma 2–8 val℃.
Reagentas Buffer AL gali būti laikomas 12 mėnesių sausomis sąlygomis;jį galima laikyti 2-8℃ilgesniam laikymui.
Reagentas Foregene Protease turi unikalią formulę.Norėdami užtikrinti jo aktyvumą ir stabilumą, laikykite jį 4℃12 mėnesių.
6 reagentas×DNR įkėlimo buferis gali būti laikomas 4℃arba -20℃ilgam laikui.
Šio rinkinio II dalis turėtų būti laikoma -20 temperatūroje℃.
2 reagentas×Lengvas PGRTMMix (UNG), jei jis naudojamas dažnai, jis taip pat gali būti laikomas 4℃trumpalaikiam saugojimui (sunaudoti per 10 dienų).
