Gyvūnų bendros RNR izoliacijos rinkinys Viso RNR ekstrahavimo ir gryninimo rinkiniai gyvūnų audiniams ir ląstelėms
Komplekto aprašymas:
Greitai ir efektyviai išgaukite labai gryną ir kokybišką bendrą RNR iš įvairių gyvūnų audinių.
Nereikia jaudintis dėl RNR degradacijos.Visa sistema yra be RNazės
Efektyviai pašalinkite DNR naudodami DNR valymo kolonėlę
Pašalinkite DNR nepridedant DNazės
Paprasta – visos operacijos atliekamos kambario temperatūroje
Greitas – operacija gali būti baigta per 30 minučių
Saugus – nenaudojamas organinis reagentas
Didelis grynumas – OD260/280≈1,8-2,1
Rinkinių aprašymai
50 pasiruošimų, 200 pasiruošimų
Šiame rinkinyje naudojamisukimosi kolonėlė ir formulėsukurta mūsų įmonės, kuri gali išgauti labai gryną ir kokybišką bendrą RNR iš įvairių gyvūnų audinių su dideliu efektyvumu.Ji suteikia efektyvią DNR valymo kolonėlę, kuri gali lengvai atskirti ir adsorbuoti genominę DNR iš supernatanto ir audinių lizato, paprasta ir taupanti laiką;Kolonėlė, kurioje yra tik RNR, gali efektyviai surišti RNR ir gali būti apdorojama vienu metu naudojant unikalią formulę. Daug mėginių.
Visa sistema yra be RNazių, todėl išgauta RNR nesuardoma;Buferis RW1, Buferis RW2 buferio plovimo sistema, kad gautoje RNR nebūtų baltymų, DNR, jonų ir organinių junginių taršos.
Komplekto komponentai
| Gyvūnų bendros RNR izoliacijos rinkinys | ||
| Komplekto komponentai | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Buferis RL1* | 25 ml | 100 ml |
| Buferis RL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buferis RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buferis RW2 | 24 ml | 96 ml |
| Be RNazės ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| Tik RNR stulpelis | 50 | 200 |
| DNR valymo kolonėlė | 50 | 200 |
| Instrukcijų vadovas | 1 gabalėlis | 1 gabalėlis |
Produkto informacija
| Formatas | Sukimo kolonėlė | Valymo komponentas | Foregene kolonėlė, reagentas |
| Flux | 1-24 mėginiai | Pasiruošimo laikas | ~30 min (24 pavyzdžiai) |
| Centrifuga | Stalinė centrifuga | Pirolizės atskyrimas | Išcentrinis atskyrimas |
| Pavyzdys | Gyvūnų audiniai;ląstelė | Mėginių kiekis | Audinys: 10-20 mg;Ląstelė: (1–5) × 106 |
| Eliuacijos tūris | 50-200 μL | Maksimalus įkrovimo tūris | 850 μl |
Savybės ir privalumai
■ Nereikia jaudintis dėl RNR degradacijos;visa sistema yra be RNazės
■ Efektyviai pašalinkite DNR naudodami DNR valymo kolonėlę
■ Pašalinkite DNR nepridedant DNazės
■ Paprastos operacijos atliekamos kambario temperatūroje
■ Greitas veikimas gali būti baigtas per 30 minučių
■ Saugus – nereikia organinio reagento
■ Didelio grynumo -OD260/280≈1,8-2,1
Komplekto taikymas
Jis tinka visos RNR ekstrahavimui ir gryninimui iš įvairių šviežių arba šaldytų gyvūnų audinių arba kultivuotų ląstelių.
Produkto parametrai
■ Taikymas pasroviui: pirmosios krypties cDNR sintezė, RT-PGR, molekulinis klonavimas, Northern Blot ir kt.
■ Mėginiai: gyvūnų audiniai, kultivuotos ląstelės
■ Dozavimas: audiniai 10-20 mg, ląstelės (2-5) × 106
■ Didžiausia gryninimo kolonėlės DNR surišimo talpa: 80 μg
■ Eliuacijos tūris: 50-200 μl
Diagrama
Gyvūnų bendros RNR izoliacijos rinkinys, apdorotas 20 mg
Švieži pelių mėginiai, paimkite 5% išgrynintos bendros RNR 1% agaro
Glikogelio elektroforezė
1: blužnis 2: inkstai
3: kepenys 4: širdis
Sandėliavimas ir tinkamumo laikas
Rinkinį galima laikyti 24 mėnesius kambario temperatūroje (15–25 ℃) arba 2–8 ℃ ilgiau.Buferis RL1 gali būti laikomas 4 ℃ temperatūroje 1 mėnesį po β-merkaptoetanolio (pasirinktinai).
Cituoti straipsniai
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R. ir kt.mRNR įkrautos į lipidus panašios nanodalelės, skirtos kepenų bazei redaguoti optimizuojant centrinį kompozicinį dizainą.Adv.Funkcija.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J ir kt.Spontaniška ląstelių apoptozė terapinio kamieninių ląstelių preparate sukelia imunomoduliacinį poveikį, nes išsiskiria fosfatidilserinas.Signal Transduct Target Ther.2021 m. liepos 14 d.; 6 (1): 270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF:17.97: Dai Z, Liu H, Liao J ir kt.N7-metilguanozino tRNR modifikacija sustiprina onkogeninę mRNR transliaciją ir skatina intrahepatinės cholangiokarcinomos progresavimą.Mol Cell.2021 m. liepos 29 d.: S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF:9.225: Cao X, Shu Y, Chen Y ir kt.Mettl14 tarpininkaujanti m6A modifikacija palengvina kepenų regeneraciją išlaikant endoplazminio retikulumo homeostazę.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
RNR izoliacijos rinkiniai kitų pavyzdžių šaltiniųyra prieinami:
Ląstelė, augalas, virusas, kraujas ir kt.
RNR nėra išgaunama arba RNR išeiga yra maža
Dažnai yra įvairių veiksnių, turinčių įtakos atkūrimo efektyvumui, pavyzdžiui: audinių mėginio RNR kiekis, veikimo būdas, eliuavimo tūris ir kt.
1. Eksploatacijos metu atlikta ledo vonia arba kriogeninė (4 °C) centrifuga.
Rekomendacija: Viso proceso metu naudokite kambario temperatūroje (15-25 °C), nenaudokite ledo vonios ir centrifuguokite žemoje temperatūroje.
2. Netinkamas mėginio konservavimas arba pernelyg ilgas mėginio laikymo laikas.
Rekomendacija: Mėginius laikykite -80 °C temperatūroje arba užšaldykite skystame azote ir venkite pakartotinio užšaldymo-atšildymo;pabandykite naudoti šviežius audinius arba kultivuotas ląsteles RNR ekstrahavimui.
3. Nepakankama mėginio lizė.
Rekomendacija: homogenizuodami audinį įsitikinkite, kad audinys yra pakankamai homogenizuotas ir kad audinių ląstelės pakankamai suskilusios, kad paaiškintų RNR išsiskyrimą.
4. Eliuentas įpiltas netinkamai.
Rekomendacija: patvirtinkite, kad ddH yra be RNase2O įlašinama į gryninimo kolonėlės membranos vidurį.
5. Į buferį RL2 arba buferį RW2 nebuvo pridėtas tinkamas absoliutaus etanolio tūris.
Rekomendacija: vadovaukitės instrukcijomis, įpilkite reikiamą kiekį absoliutaus etanolio į Buffer RL2 ir Buffer RW2 ir gerai išmaišykite prieš naudodami rinkinį.
6. Audinių mėginio dozė netinkama.
Rekomendacija: naudokite 10–20 mg audinio arba (1–5) × 106ląstelių 500 μl buferio RL1, nes per didelis audinių naudojimas gali sumažinti RNR ekstrahavimą.
7. Netinkamas eliuavimo tūris arba nepilnas eliuavimas.
Rekomendacija: gryninimo kolonėlės eliuavimo tūris yra 50-200 μl;jei eliuavimo efektas nepatenkinamas, rekomenduojama pratęsti kambario temperatūros įdėjimo laiką įpylus pašildyto RNase-Free ddH2O, pvz., 5-10 min.
8. Po buferio RW2 plovimo valymo kolonėlėje yra etanolio likučių.
Rekomendacija: Jei po buferio RW2 plovimo, tuščio mėgintuvėlio centrifugavimo 1 min. lieka etanolio, tuščio mėgintuvėlio centrifugavimo operacijos laikas gali būti padidintas iki 2 min. arba valymo kolonėlę galima pastatyti kambario temperatūroje 5 min., kad būtų tinkamai pašalintas etanolio likutis.
Išgryninta RNR suskaidoma
Išgrynintos RNR kokybė yra susijusi su tokiais veiksniais kaip mėginio išsaugojimas, užteršimas Rnaze, manipuliavimas ir kt.
1. Audinių mėginiai nėra laikomi laiku.
Rekomendacija: Jei po paėmimo audinių mėginiai ar ląstelės nepanaudojami laiku, nedelsiant šaldykite -80 °C temperatūroje arba skystu azotu.Norėdami išgauti RNR, kai tik įmanoma, naudokite naujai paimtą audinio ar ląstelės mėginį.
2. Pakartotinis audinių mėginių užšaldymas-atšildymas.
Rekomendacija: Laikant audinių mėginius, geriausia juos supjaustyti į mažus gabalėlius, kad būtų išsaugotas, o naudojant vieną iš gabalėlių pašalinti, kad mėginys nepasikartotų užšalimas-atšildymas ir RNR nesuirtų.
3. Operacijos metu įvesta RNazė arba nedėvima vienkartinių pirštinių, kaukių ir pan.
Rekomendacija: RNR ekstrahavimo eksperimentus geriausia atlikti atskirose RNR manipuliavimo patalpose, o stalas prieš eksperimentą nuvalomas.
Eksperimento metu dėvėkite vienkartines pirštines ir kaukes, kad sumažintumėte RNR degradaciją, kurią sukelia RNazės įvedimas.
4. Reagentai naudojimo metu yra užteršti RNaze.
Rekomendacija: susijusiems eksperimentams pakeiskite nauju gyvūnų viso RNR izoliavimo rinkiniu.
5. RNR manipuliavimui naudojami centrifugos mėgintuvėliai, antgaliai ir kt. yra užteršti RNaze.
Rekomendacija: įsitikinkite, kad centrifugos mėgintuvėliai, antgaliai, pipetės ir kt., naudojami RNR ekstrahavimui, yra be RNazės.
Išgryninta gauta RNR veikia tolesnius eksperimentus
RNR, išgryninta valymo kolonėlėje, jei druskos jonai, baltymų kiekis yra per didelis, turės įtakos tolesniam eksperimentui, pavyzdžiui: atvirkštinė transkripcija, Northern Blot ir kt.
1. Eliuuota RNR turi druskos jonų likučių.
Rekomendacija: Patvirtinkite, kad į buferį RW2 įpiltas reikiamas tūris etanolio, ir atlikite 2 valymo kolonėlės plovimus nurodytu veikimo išcentriniu greičiu;jei yra druskos jonų likučių, palikite valymo kolonėlę į buferį RW2 5 minutes kambario temperatūroje ir atlikite centrifugavimą, kad maksimaliai pašalintumėte druskos užterštumą.
2. Etanolio likutis eliuuotoje RNR.
Rekomendacija: Patvirtinkite, kad po buferio RW2 plovimo tuščio mėgintuvėlio centrifugavimo operaciją atlikite nurodytu veikimo greičiu, padidinkite tuščio mėgintuvėlio centrifugavimo laiką iki 2 min., jei vis dar yra etanolio likučių, arba palikite jį kambario temperatūroje 5 minutes po tuščio mėgintuvėlio centrifugavimo, kad maksimaliai pašalintumėte etanolio likučius.
