Plant Total RNR izoliacijos rinkinys Plus Total RNR valymo rinkinys augalams, kuriuose gausu polisacharidų ir polifenolių
Komplekto aprašymas:
Kat.Nr.RE-05021/05022/05024
Bendros RNR gryninimui iš bendrų augalų mėginių, kuriuose yra daug polisacharidų ir polifenolių komponentų.
Greitai ištraukite aukštos kokybės bendrą RNR iš augalų mėginių, kuriuose yra daug polisacharidų ir polifenolių.
Be RNazės naudojant DNR valymo kolonėlę
Paprasta – visos operacijos atliekamos kambario temperatūroje
Greitas – operacija gali būti baigta per 30 minučių
Saugus – nenaudojamas organinis reagentas 
Specifikacijos
50 pasiruošimų, 200 pasiruošimų
Rinkinyje naudojama Foregene sukurta sukimo kolonėlė ir formulė, kuri gali efektyviai išgauti labai gryną ir aukštos kokybės bendrą RNR iš įvairių augalų audinių, kuriuose yra daug polisacharidų ar polifenolių.Jame yra DNR valymo kolonėlė, kuri gali lengvai pašalinti genominę DNR iš supernatanto ir audinių lizato.Tik RNR kolonėlė gali veiksmingai surišti RNR.Rinkinys vienu metu gali apdoroti daug mėginių.
Visoje sistemoje nėra RNazės, todėl išgryninta RNR nebus skaidoma.Buferis PRW1 ir buferis PRW2 gali užtikrinti, kad gauta RNR nebūtų užteršta baltymais, DNR, jonais ir organiniais junginiais.
Komplekto komponentai
| Buferis PSL1, buferis PS, buferis PSL2 |
| Buferis PRW1, buferis PRW2 |
| DdH be RNazių2O, DNR valymo kolonėlė |
| Tik RNR stulpelis |
Savybės ir privalumai
■ Veikimas kambario temperatūroje (15-25 ℃) viso proceso metu, be ledo vonios ir centrifugavimo žemoje temperatūroje.
■ Pilnas rinkinys be RNazių, nereikia jaudintis dėl RNR degradacijos.
■ Ypač tinka RNR išgryninimui iš augalų polisacharidų ir polifenolių mėginių.
■ DNR valymo kolonėlė specifiškai susijungia su DNR, todėl rinkinys gali pašalinti genominę DNR užteršimą nepridedant DNazės.
■ Didelė RNR išeiga: tik RNR kolonėlė ir unikali formulė gali efektyviai išvalyti RNR.
■ Greitas greitis: lengva valdyti ir užbaigti per 30 minučių.
■ Sauga: nereikia jokio organinio reagento.
■ Aukšta kokybė: išgryninti RNR fragmentai yra labai gryni, juose nėra baltymų ir kitų priemaišų ir gali būti naudojami įvairiems eksperimentiniams tikslams.
Produkto parametrai
■ Taikymas pasroviui: pirmosios krypties cDNR sintezė, RT-PGR, molekulinis klonavimas, Northern Blot ir kt.
■ Mėginys: švieži arba sušaldyti augalų audiniai iš polisacharidų ir polifenolių
■ Dozavimas: 50mg augalinio audinio
■ Didžiausia gryninimo kolonėlės RNR surišimo talpa: 80 μg
■ Eliuacijos tūris: 50-200 μl
Komplekto taikymas
Tinka visos RNR ekstrahavimui ir gryninimui iš šviežių arba šaldytų augalų audinių mėginių (ypač šviežių augalų lapų audinių), kuriuose yra daug polisacharidų ir polifenolių.
Darbo eiga
Diagrama
Plant Total RNA Isolation Kit Plus apdorojo 50 mg šviežių polisacharidų ir polifenolių lapų, o 5 % išgrynintos RNR buvo ištirta elektroforezės būdu.
1: bananas
2: Ginkmedis
3: medvilnė
4: granatas
Sandėliavimas ir galiojimo laikas
Šis rinkinys gali būti laikomas 24 mėnesius sausomis sąlygomis kambario temperatūroje (15-25 ℃);jei reikia laikyti ilgiau, galima laikyti 2–8 ℃ temperatūroje.
Buferis PSL1 gali būti laikomas 4 ℃ temperatūroje 1 mėnesiui po β-merkaptoetanolio pridėjimo (rekomenduojama dėti tuo pačiu eksperimento metu).
Stulpelis užsikimšęs
Užkimšus kolonėlę, RNR išeiga sumažėja arba net neįmanoma išgryninti RNR, o gauta RNR masė maža.
Įprastų priežasčių analizė:
1. Mėginių pertraukos nėra išsamios.
Mėginio lūžimas ne visiškai užblokuoja DNR VALYMO SOLULĖLĖS, o turi įtakos RNR išeigai ir kokybei.Rekomenduojame greitai sumalti, esant pakankamai skysto azoto, kai sulaužote mėginius. Pabandykite sutraiškyti mėginio ląstelės sienelę, ląstelės membraną ir kitus audinius.Poliolio polisacharidų augalų mėginiams rekomenduojame naudoti Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
2. Išsiurbiant atskirtą mėginio supernatantą su DNR valymo kolonėle, galimas ląstelių fragmentuotas nuosėdas galima įkvėpti.
Paimtos ląstelių suskaidytos nuosėdos sukels stulpelį, kuriame yra TIK RNR, kuris bus užblokuotas, kai bus atlikta RNR adsorbcijos operacija (žr. 6 veiksmą).Siurbiant šį supernatantą rekomenduojame atsargiai, kad nesusiurbtumėte ląstelių nuolaužų.
3. Pradinis mėginio kiekis yra per didelis.
Pernelyg didelis mėginio naudojimas sukels nepilną mėginio suskaidymą arba nepilną ląstelių lizę naudojant buferį PSL1, todėl valymo metu bus užblokuota valymo kolonėlė.Augalų bendros RNR izoliacijos rinkinys Kiekvienas išgrynintas operatyvinis mėginys yra 50 mg.Poliolio polisacharidų augalų mėginiams rekomenduojame išbandyti Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
4. Centrifugos temperatūra per žema.
Visas RNR išskyrimo ir gryninimo procesas atliekamas kambario temperatūroje (20-25°C), išskyrus tai, kad mėginio audinį sulaužo skystas azotas. Kai kurių kriogeninių centrifugų temperatūra yra žemesnė nei 20℃, kuris gali užblokuoti DNR valymo kolonėlę ir (arba) tik RNR kolonėlę.Jei taip atsitiks, nustatykite centrifugos temperatūrą į 20–25 laipsnių℃, irįsitikinkite, kad lizės mišinys ir (arba) supernatantas su etanoliu buvo pašildytas iki 37°C.
RNR neišskiriama arba RNR išeiga yra maža
Paprastai yra daug veiksnių, turinčių įtakos regeneravimo efektyvumui, pavyzdžiui: mėginio RNR kiekis, veikimo metodas, eliuavimo tūris ir kt.
Toliau pateikiama bendrų priežasčių analizė:
1. Operacijos metu buvo atlikta ledo vonia arba žemos temperatūros (4°C) centrifugavimas.
Patarimas: Naudoti kambario temperatūroje (15-25°C) viso proceso metu nedarykite ledo vonios ir centrifugavimo žemoje temperatūroje.
2. RNR buvo suardyta dėl netinkamo mėginio konservavimo arba ilgalaikio mėginio išsaugojimo.
Rekomendacija: Šviežiai paimtus mėginius reikia greitai užšaldyti skystame azote ir ilgai laikyti -80°C temperatūroje, vengti pakartotinio mėginių užšalimo ir atšildymo;arba iš karto pamirkykite mėginius RNR stabilizatoriaus RNAlater tirpale (gyvūnų mėginiai).
3. Dėl nepakankamo mėginio suskaidymo ir lizės užsikemša valymo kolonėlė.
Patarimas: šlifuodami audinį įsitikinkite, kad audinys pakankamai sumaltas, ir greitai perkelkite jį į iš anksto paruoštą buferį PSL1 (patvirtinkite, kad buvo pridėta tinkama β-ME dalis, žr. 1 procedūros veiksmą).
4. Eliuentas buvo pridėtas neteisingai.
Patarimas: Įsitikinkite, kad RNase-Free ddH2O yra lašinamas į valymo kolonėlės membranos vidurį.
5. Į buferį PSL2 arba buferį PRW2 nebuvo pridėtas tinkamas absoliutaus etanolio tūris.
Patarimas: vadovaukitės instrukcijomis, į PSL2 ir PRW2 buferį įpilkite reikiamą absoliutaus etanolio kiekį ir gerai išmaišykite prieš naudodami rinkinį.
6. Audinių mėginio kiekis yra netinkamas.
Patarimas: naudokite 50 mg audinio 500 μl buferio PSL1.Naudojant per daug audinių sumažės išgaunamos RNR kiekis, o gautos RNR grynumas taip pat sumažės.Primygtinai rekomenduojame, kad pradinė mėginio dozė neviršytų 50 mg vienai RNR ekstrahavimo operacijai.
7.Netinkamas eliuavimo tūris arba nepilnas eliuavimas.
Siūlymas: gryninimo kolonėlės eliuento tūris yra 50-200 μl;jei eliuavimo efektas nepatenkinamas, rekomenduojama pratęsti laiką kambario temperatūroje, įpylus pašildyto RNase-Free ddH2O, pvz., 5-10min.
8. Išplovus buferiu PRW2, valymo kolonėlėje yra etanolio likučių.
Patarimas: jei tuščias mėgintuvėlis centrifuguojamas 1 min., o po plovimo buferyje PRW2 vis dar liko etanolio, galite padidinti tuščio mėgintuvėlio centrifugavimo laiką iki 2 min. arba padėkite valymo kolonėlę kambario temperatūroje 5 min., kad visiškai pašalintumėte likutinį etanolį.
9. Rinkinys buvo naudojamas netinkamai.
Patarimas: polifenolinių polisacharidų augalų mėginiams, naudojant įprastus rinkinius, tokius kaip Plant Total RNA Isolation Kit, gali nepavykti gauti idealių RNR mėginių.Rekomenduojame naudoti Plant Total RNA IsolationKit Plus, kuris yra specialiai sukurtas polifenolinių polisacharidų augalų mėginiams.Rinkinys, specialiai sukurtas RNR ekstrahavimui iš polifenolių ir polisacharidų augalų mėginių.
OD260/OD280 vertė yra maža
RNR eliuavimas naudojant ddH2O ir naudojamas spektrofotometro rodmenims duoda mažas OD260/OD280 vertes.Rekomenduojame naudoti 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (o ne RNazės neturintį ddH2O RNR eliuavimui), kad gautume santykinai teisingas OD260/OD280 vertes, žr. „RNR koncentracijos ir gryninimo tyrimai“ 19 puslapyje.
Išgryninta RNR suskaidoma
Išgrynintos RNR kokybė yra susijusi su tokiais veiksniais kaip mėginio išsaugojimas, užteršimas Rnaze ir manipuliavimas.
Įprastų priežasčių analizė:
1. Audinių mėginiai nebuvo laiku laikomi po paėmimo.
Rekomendacija: Jei po paėmimo audinių mėginiai nepanaudojami laiku, nedelsdami laikykite juos skystame azote žemoje temperatūroje arba perkelkite į -80°C ilgalaikiam saugojimui po greito užšaldymo skystame azote arba nedelsdami panardinkite mėginius į RNR stabilizatoriaus RNAlater tirpalą (gyvūnų mėginiai).RNR ekstrahavimui pabandykite naudoti ką tik paimtus audinių mėginius.
2.Pakartotinis audinių mėginių užšaldymas ir atšildymas.
Patarimas: Laikant audinių mėginius, geriausia juos supjaustyti į mažus gabalėlius konservavimui, o naudojant dalį išimti, kad būtų išvengta RNR skilimo, kurį sukelia pakartotinis mėginių užšaldymas ir atšildymas.
3.RNase įvedama į operacijų kambarį arba nedėvimos vienkartinės pirštinės, kaukės ir pan.
Patarimas: RNR ekstrahavimo eksperimentus geriausia atlikti atliekant atskiras RNR operacijas, o prieš eksperimentą nuvalyti laboratorijos stalą, o eksperimento metu mūvėti vienkartines pirštines ir kaukes, kad būtų išvengta RNR degradacijos, kurią sukelia RNazės įvedimas.
4. Naudojimo metu reagentas yra užterštas RNaze.
Patarimas: susijusiems eksperimentams pakeiskite nauja augalų bendros RNR ekstrahavimo rinkinių serija.
5. RNR manipuliavimui naudojami centrifugos mėgintuvėliai ir pipetės antgaliai yra užteršti RNaze.
Patarimas: Įsitikinkite, kad centrifugos mėgintuvėliai, pipetės antgaliai, pipetės ir kt., naudojami RNR ekstrahavimui, yra be RNazės.
Instrukcijų vadovai:
„Plant Total RNA Isolation Kit Plus“ naudojimo instrukcija
