(96 šulinėlių) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR rinkinys – SYBR Green I
Aprašymai
The(96 šulinėlių) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR rinkinys–SYBR Green Inumatounikali lizės buferio sistemato greitai išskiria RNRiš kultivuotos ląstelėsmėginiai RT-qPCR reakcijoms, todėl nereikia daug laiko ir pastangųRNR gryninimo procesas, ir reikia tik 7 minučių gauti reikiamą RNR šabloną.The5 × tiesioginis RT mišinysir2 × Tiesioginis qPCR Mix-SYBRpateikta dėžutėje gali greitai irefektyviai gauti realaus laiko kiekybinius duomenisPGR rezultatai.
5× Direct RT Mix ir 2× Direct qPCR Mix-SYBR turi stiprią inhibitorių toleranciją ir gali naudoti bandinio lizatą, kurį reikia tirti, kaip šabloną efektyviai atvirkštinei transkripcijai ir specifiniam amplifikavimui.Reagento sudėtyje yra unikalios Foregene atvirkštinės transkriptazės, turinčios didelį afinitetą RNR, taip pat karštosios D-Taq DNR polimerazės, dNTP, MgCl.2 , reakcijos buferis, PGR optimizatorius ir stabilizatorius, ir gali būti naudojamas kartu su lizės buferiu, kad būtų galima greitai, lengvai ir tiksliai aptikti mėginį, ir jis pasižymi didelio jautrumo, stipraus specifiškumo ir gero stabilumo savybėmis.
Rinkinys skirtas 96 šulinėlių kultivuotų ląstelių mikrosisteminei lizei, turi gerą vienodumą ir nuoseklumą;rinkinio komponentai suteikia 96 lizės reakcijas, 96 atvirkštinės transkripcijos reakcijas ir 96 × 2 qPCR reakcijas, kurios gali atitikti 96 šulinėlių ląstelių plokštelę vienkartiniam naudojimui, išvengiant taršos, kurią sukelia pakartotinis reagentų atidarymas, užšalimas ir atšildymas bei reagento veikimo pablogėjimas.
Komplekto komponentai
| Komplekto sudėtis ( 50 μL lizės sistema/20 μlRT reakcijos sistema /20μL qPCR reakcijos sistema) | DRT-03011 | Pastaba | |
| 96T | |||
| dalisI | BuferisCL | 5 ml | LąstelėLizė |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| BuferisST | 500 μL | ||
| dalis II | DNRTrintukas | 100 μL | |
| 5 × tiesioginis RT mišinys | 400 μL | RT | |
| 2 × tiesioginis qPCR mišinys-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX etaloninis dažiklis | 400µL | ||
| RNazė- LaisvasddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Mmetinis | 1 gabalas | 1 porcija | |
*: Lizės reagentas DNA Eraser yra įtrauktas į rinkinio II dalį;Ląstelių lizės, RT ir qPCR komponentus galima įsigyti atskirai.
Savybės ir privalumai
■Paprasta ir efektyvu: naudojant „Cell Direct RT“ technologiją, RNR mėginius galima gauti vos per 7 minutes.
■ Mėginio poreikis mažas, galima ištirti net 10 langelių.
■ Didelis pralaidumas: jis gali greitai aptikti RNR ląstelėse, kultivuotose 384, 96, 24, 12, 6 šulinėlių plokštelėse.
■ DNA Eraser gali greitai pašalinti išlaisvintus genomus, labai sumažinti poveikį tolesniems eksperimentų rezultatams.
■ Dėl optimizuotos RT ir qPCR sistemos dviejų pakopų RT-PGR atvirkštinė transkripcija tampa efektyvesnė, o PGR specifiškesnė ir atsparesnė RT-qPCR reakcijos inhibitoriams.
Komplekto taikymas
Taikymo sritis: kultivuojamos ląstelės.
- RNR, išsiskirianti lizuojant mėginį: taikoma tik šio rinkinio RT-qPCR šablonui.
- Rinkinį galima naudoti šiems tikslams: genų ekspresijos analizei, siRNR sukelto genų slopinimo efekto patikrinimui, vaistų patikrai ir kt.
Sandėliavimas ir galiojimo laikas
Šio rinkinio I dalis turėtų būti laikoma 4℃;II dalis turėtų būti laikoma -20 ℃ temperatūroje.
Foregene Protease Plus II reikia laikyti 4℃, neužšaldykite esant -20 ℃.
2 reagentas×Tiesioginis qPCR Mix-Taqman turi būti laikomas -20 temperatūroje℃tamsoje;jei naudojamas dažnai, jis taip pat gali būti laikomas 4℃ trumpalaikiam saugojimui (sunaudoti per 10 dienų).
Realaus laiko PGR pradmenų projektavimo principai
Priekinis gruntas ir atvirkštinis gruntas
Realaus laiko PGR atveju pradmenų dizainas yra labai svarbus.Pradmenys yra susiję su PGR amplifikacijos specifiškumu ir efektyvumu ir gali būti sukurti remiantis šiais principais:
- Grunto ilgis: 18-30bp.
- GC kiekis: 40-60%.
- Tm reikšmė: Grunto projektavimo programinė įranga, pvz., Primer 5, gali pateikti grunto Tm vertę.Prieš srovę ir pasroviui esančių pradmenų Tm vertės turi būti kuo artimesnės.Taip pat galima naudoti Tm skaičiavimo formulę: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Atliekant PGR, kaip atkaitinimo temperatūra paprastai pasirenkama žemesnė už pradmenų Tm reikšmę 5 °C temperatūra (atitinkamas atkaitinimo temperatūros padidėjimas gali padidinti PGR reakcijos specifiškumą).
- Gruntai ir PGR produktai:
- Dizaino pradmenų PGR amplifikacijos produkto ilgis pageidautina 100-150 bp.
- Reikėtų kiek įmanoma vengti dizaino gruntų antrinėje struktūrinėje šablono srityje.
- Venkite 2 ar daugiau vienas kitą papildančių bazių susidarymo tarp prieš srovę ir pasroviui esančių pradmenų 3′ galų.
- Grunto 3′ gnybtų pagrindo negali būti su 3 papildomais iš eilės G arba C.
- Patys pradmenys negali turėti papildomų struktūrų, kitaip susiformuos plaukų segtuko struktūra, turinti įtakos PGR amplifikacijai.
- ATCG turėtų būti paskirstytas kiek įmanoma tolygiau pradmenų sekoje, o 3′ galinės bazės turėtų būti vengiama kaip T.
Priedas1:Cell TiesioginisRT-qPCR Komplekto komponentast papildų pakuotė
1.Ląstelių lizės tirpalas
| Ląstelių lizės tirpalas | |||
| Komplekto komponentai (24 šulinėlių lizės sistema / šulinys) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| dalisaš | Buferis CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buferis ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| dalisII | DNR trintukas | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT mišinys | |
| Komplekto komponentai (20 μl reakcijos sistema) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × tiesioginis RT mišinys | 800 μl |
| DdH be RNazių2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR mišinys | ||
| Komplekto komponentai (20 μl reakcijos sistema) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2 × Tiesioginis qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX etaloninis dažiklis | 40 μl | 200 μl |
| DdH be RNazių2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instrukcijų vadovai:
