DUK skirtiGyvūnų bendros RNR izoliacijos rinkinys

Toliau pateikiama problemų, su kuriomis galite susidurti, analizėgyvūnų audinių/ląstelių RNR ekstrahavimas will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNR nėra išgaunama arba RNR išeiga yra maža

Dažnai yra įvairių veiksnių, turinčių įtakos atkūrimo efektyvumui, pavyzdžiui: audinių mėginio RNR kiekis, veikimo būdas, eliuavimo tūris ir kt.

1. Eksploatacijos metu atlikta ledo vonia arba kriogeninė (4 °C) centrifuga.

Rekomendacija: Viso proceso metu naudokite kambario temperatūroje (15-25 °C), nenaudokite ledo vonios ir centrifuguokite žemoje temperatūroje.

2. Netinkamas mėginio konservavimas arba pernelyg ilgas mėginio laikymo laikas.

Rekomendacija: Mėginius laikykite -80 °C temperatūroje arba užšaldykite skystame azote ir venkite pakartotinio užšaldymo-atšildymo;pabandykite naudoti šviežius audinius arba kultivuotas ląsteles RNR ekstrahavimui.

3. Nepakankama mėginio lizė.

Rekomendacija: homogenizuodami audinį įsitikinkite, kad audinys yra pakankamai homogenizuotas ir kad audinių ląstelės pakankamai suskilusios, kad paaiškintų RNR išsiskyrimą.

4. Eliuentas įpiltas netinkamai.

Rekomendacija: patvirtinkite, kad ddH yra be RNase₂O įlašinama į gryninimo kolonėlės membranos vidurį.

5. Į buferį RL2 arba buferį RW2 nebuvo pridėtas tinkamas absoliutaus etanolio tūris.

Rekomendacija: vadovaukitės instrukcijomis, įpilkite reikiamą kiekį absoliutaus etanolio į Buffer RL2 ir Buffer RW2 ir gerai išmaišykite prieš naudodami rinkinį.

6. Audinių mėginio dozė netinkama.

Rekomendacija: naudokite 10–20 mg audinio arba (1–5) × 10⁶ląstelių 500 μl buferio RL1, nes per didelis audinių naudojimas gali sumažinti RNR ekstrahavimą.

7. Netinkamas eliuavimo tūris arba nepilnas eliuavimas.

Rekomendacija: gryninimo kolonėlės eliuavimo tūris yra 50-200 μl;jei eliuavimo efektas nepatenkinamas, rekomenduojama pratęsti kambario temperatūros įdėjimo laiką įpylus pašildyto RNase-Free ddH₂O, pvz., 5-10 min.

8. Po buferio RW2 plovimo valymo kolonėlėje yra etanolio likučių.

Rekomendacija: Jei po buferio RW2 plovimo, tuščio mėgintuvėlio centrifugavimo 1 min. lieka etanolio, tuščio mėgintuvėlio centrifugavimo operacijos laikas gali būti padidintas iki 2 min. arba valymo kolonėlę galima pastatyti kambario temperatūroje 5 min., kad būtų tinkamai pašalintas etanolio likutis.

Išgryninta RNR suskaidoma

Išgrynintos RNR kokybė yra susijusi su tokiais veiksniais kaip mėginio išsaugojimas, užteršimas Rnaze, manipuliavimas ir kt.

1. Audinių mėginiai nėra laikomi laiku.

Rekomendacija: Jei po paėmimo audinių mėginiai ar ląstelės nepanaudojami laiku, nedelsiant šaldykite -80 °C temperatūroje arba skystu azotu.Norėdami išgauti RNR, kai tik įmanoma, naudokite naujai paimtą audinio ar ląstelės mėginį.

2. Pakartotinis audinių mėginių užšaldymas-atšildymas.

Rekomendacija: Laikant audinių mėginius, geriausia juos supjaustyti į mažus gabalėlius, kad būtų išsaugotas, o naudojant vieną iš gabalėlių pašalinti, kad mėginys nepasikartotų užšalimas-atšildymas ir RNR nesuirtų.

3. Operacijos metu įvesta RNazė arba nedėvima vienkartinių pirštinių, kaukių ir pan.

Rekomendacija: RNR ekstrahavimo eksperimentus geriausia atlikti atskirose RNR manipuliavimo patalpose, o stalas prieš eksperimentą nuvalomas.

Eksperimento metu dėvėkite vienkartines pirštines ir kaukes, kad sumažintumėte RNR degradaciją, kurią sukelia RNazės įvedimas.

4. Reagentai naudojimo metu yra užteršti RNaze.

Rekomendacija: susijusiems eksperimentams pakeiskite nauju gyvūnų viso RNR izoliavimo rinkiniu.

5. RNR manipuliavimui naudojami centrifugos mėgintuvėliai, antgaliai ir kt. yra užteršti RNaze.

Rekomendacija: įsitikinkite, kad centrifugos mėgintuvėliai, antgaliai, pipetės ir kt., naudojami RNR ekstrahavimui, yra be RNazės.

Išgryninta gauta RNR veikia tolesnius eksperimentus

RNR, išgryninta valymo kolonėlėje, jei druskos jonai, baltymų kiekis yra per didelis, turės įtakos tolesniam eksperimentui, pavyzdžiui: atvirkštinė transkripcija, Northern Blot ir kt.

1. Eliuuota RNR turi druskos jonų likučių.

Rekomendacija: Patvirtinkite, kad į buferį RW2 įpiltas reikiamas tūris etanolio, ir atlikite 2 valymo kolonėlės plovimus nurodytu veikimo išcentriniu greičiu;jei yra druskos jonų likučių, palikite valymo kolonėlę į buferį RW2 5 minutes kambario temperatūroje ir atlikite centrifugavimą, kad maksimaliai pašalintumėte druskos užterštumą.

2. Etanolio likutis eliuuotoje RNR.

Rekomendacija: Patvirtinkite, kad po buferio RW2 plovimo tuščio mėgintuvėlio centrifugavimo operaciją atlikite nurodytu veikimo greičiu, padidinkite tuščio mėgintuvėlio centrifugavimo laiką iki 2 min., jei vis dar yra etanolio likučių, arba palikite jį kambario temperatūroje 5 minutes po tuščio mėgintuvėlio centrifugavimo, kad maksimaliai pašalintumėte etanolio likučius.

Nulceino rūgšties mėginių tipų išskyrimas

Foregene RNR izoliavimo rinkiniai gali gauti visišką RNR išskyrimą / ekstrahavimą iš šių mėginių šaltinių: gyvūnų audinių, augalų, ląstelių, virusų, kraujo ir kt.

Kaip laikyti rinkinį

Laikyti kambario temperatūroje 24 mėnesius.