Mažą A260/A230 santykį dažniausiai sukelia priemaišos, kurių didžiausias sugerties bangos ilgis esant 230 nm.Pažiūrėkime, ką sudaro šios priemaišos:

• Dažni teršalai	Absorbcijos bangos ilgis	Santykio efektas
  Baltymas	~230nm ir 280nm	Tuo pačiu metu sumažintas A260/A 280ir A260/A 280santykius
  Guanidino druska	220-240 nm	Sumažinkite A260/A 280santykis
  fenolis	~270nm	-
  Trizolis	~230nm ir 270nm	Sumažinkite A260/A 280santykis
  EDTA	~230nm	Sumažinkite A260/A 280santykis
  Etanolis	230-240 nm	Sumažinkite A260/A 280santykis

 
 
 
Įprastų teršalų sugerties bangos ilgis ir kontrasto vertė

Pužterštumas roteinu
Baltymų tarša gali būti laikoma labiausiai paplitusia tarša nukleorūgščių ekstrahavimo procese.Baltymai yra tarp viršutinės vandeninės fazės ir apatinėsekologiškasfazė.Tarša sumažins A260/A280 ir A260/A230 santykį vienu metu, o A260/A230 santykis keisis akivaizdžiau nei santykis A260/A280.
Vėlesnių metuatvirkštinė transkripcijaor qPCR reakcijos, baltymų likučiai gali slopinti arba trukdyti fermentų funkcijai.Geriausias būdas išvengti užteršimo baltymais – įsiurbiant supernatantą nepamiršti principo „geriau mažiau nei daugiau, nedidelį kiekį daug kartų“.

2. Guanidinio tarša
hidrochloridas (GuHCl) ir guanidino tiocianatas (GTC) denatūruoja baltymus, kurie nukleorūgščių ekstrahavimo proceso metu gali greitai sunaikinti ląstelių membranas, sukeldami baltymų denatūravimą ir nusodinimą.GuHCl ir GTC sugerties bangos ilgis yra 220–240 nm, oguanidinio druskos likutis sumažins A260/A230 santykį.Nors guanidinio druskos likutis sumažins santykį,poveikis tolesniems eksperimentams iš tikrųjų yra nereikšmingas.

3. Trizolio užterštumas
Pagrindinis Trizol komponentas yra fenolis.Pagrindinė fenolio funkcija – ląsteles lizuoti ir ląstelėse išskirti baltymus bei nukleorūgščių medžiagas.Nors fenolis gali veiksmingai denatūruoti baltymus, jis negali visiškai slopinti RNazės aktyvumo.Todėl į TRIzolį dedama 8-hidroksichinolino, guanidino izotiocianato, β-merkaptoetanolio ir kt., siekiant slopinti endogeninę ir egzogeninę Rnazę.
Ekstrahuodamas ląstelinę RNR, Trizol gali greitai lizuoti ląsteles ir slopinti iš ląstelių išsiskiriančią nukleazę, o likęs Trizolas žymiai sumažins A260/A230 santykį.
Apdorojimo būdas: centrifuguojant reikia atkreipti dėmesį į tai, kad Trizol sudėtyje esantis fenolis lengvai tirpsta vandens fazėje esant 4° ir kambario temperatūrai.

4. Etanolio likutis
Galutiniame procese etanolis naudojamas DNR nusodinimui, tuo pačiu tirpinant druskos jonus, kurie gali būti prijungti prie DNR.Didžiausias sugerties bangos ilgisabsorbcijos pikasetanolis taip pat yra 230-240 nm, kuristaip pat sumažins A260/A230 santykį.
Metodas, kaip išvengti etanolio likučių, gali būti kartojamas du kartus galutinio eliuavimo metu, įpučiantdūmų gaubtasdvi minutes, kad etanolis visiškai išgaruotų, prieš įpilant buferio eliuavimui.
Tačiau reikia žinoti, kad santykis yra tik RNR kokybės vertinimo indeksas.Jei aukščiau nurodytos operacijos bus griežtai reglamentuotos, nuokrypis tarp santykio ir standartinio diapazono neturės didelės įtakos tolesniems eksperimentams.
Susiję produktai:
Gyvūnų bendros RNR izoliacijos rinkinys
Augalų bendros RNR izoliacijos rinkinys
Ląstelių bendros RNR izoliacijos rinkinys
Plant Total RNR izoliacijos rinkinys Plus