Žando tamponų / FTA kortelės DNR išskyrimo rinkinys Genominės DNR ekstrahavimo arba valymo rinkinys iš žando tamponų
Komplekto aprašymas:
Greitai išvalykite aukštos kokybės genominę DNR iš žandikaulio tamponų / FTA kortelės mėginių.
◮Nėra RNazės užteršimo:Komplekte pateikiama tik DNR kolonėlė leidžia pašalinti RNR iš genominės DNR nepridedant RNazės eksperimento metu, taip išvengiant laboratorijos užteršimo egzogenine RNaze.
◮Greitas greitis:Foregene proteazė turi didesnį aktyvumą nei panašios proteazės ir greitai virškina audinių mėginius;operacija paprasta, o genominės DNR išskyrimo operacija gali būti atlikta per 20-80 minučių.
◮Patogus:Centrifuguojama kambario temperatūroje, todėl nereikia centrifuguoti 4 °C žemoje temperatūroje arba nusodinti DNR etanoliu.
◮Sauga:Organinio reagento ekstrahavimas nereikalingas.
◮Aukštos kokybės:Išskirtoje genominėje DNR yra dideli fragmentai, nėra RNR, RNazės ir itin mažo jonų kiekio, kuris gali atitikti įvairių eksperimentų reikalavimus.
◮Mikroeliavimo sistema:Tai gali padidinti genominės DNR koncentraciją, kuri yra patogi aptikimui ar eksperimentui pasroviui.
apibūdinimas
Šis rinkinys yra efektyvus ir greitas būdas gauti didelės koncentracijos genominę DNR iš žandikaulio tamponų ir FTA kortelės (kraujo dėmės).Naudojant mūsų įmonę“Unikali tik DNR silicio dioksido membranos sukimo kolonėlė ir formulė, kartu su Foregene Protease, didelės koncentracijos, aukštos kokybės genomo DNR gali būti išgaunama per 80 minučių.Specialiai sukurta maža valymo kolonėlė suriša genominę DNR, o DNR gali būti eliuuojama nedideliu kiekiu (15μl) eliuavimo sistema, skirta padidinti gautos genominės DNR koncentraciją, kuri yra patogi aptikimui ar eksperimentui pasroviui.Rinkinyje vienu metu galima apdoroti vieną ar kelis mėginius, o gryninimo procesui nereikia ekstrahuoti organinių medžiagų, tokių kaip fenolis, chloroformas ir daug laiko atimantis izopropanolio ar etanolio nusodinimas, o operacija yra paprasta ir taupo laiką.
Specifikacijos
50 Pasiruošimas
Komplekto komponentai
| Buferis ST1 |
| Buferis ST2 |
| Linijinis akrilamidas |
| Buferis PW |
| Buferis WB |
| Buferis EB |
| Foregene proteazė |
| Tik DNR stulpelis |
| Instrukcijos |
Savybės ir privalumai
-Nėra užteršimo Rnaze: rinkinyje esantis tik DNR stulpelis leidžia pašalinti RNR iš genominės DNR, eksperimento metu nepridedant RNazės, taip išvengiant laboratorijos užteršimo egzogenine RNaze.
-Greitas greitis: Foregene Protease pasižymi didesniu aktyvumu nei panašios proteazės, greitai virškina mėginius;paprasta operacija.
-Patogu: centrifuguojama kambario temperatūroje, todėl nereikia centrifuguoti 4°C žemoje temperatūroje arba nusodinti DNR etanoliu.
-Saugumas: nereikia ekstrahuoti organinių reagentų.
-Aukšta kokybė: išskirta genominė DNR turi didelius fragmentus, neturi RNR, RNazės ir itin mažo jonų kiekio, kuris gali atitikti įvairių eksperimentų reikalavimus.
-Mikroeliavimo sistema: ji gali padidinti genominės DNR koncentraciją, kuri yra patogi aptikimui ar eksperimentui pasroviui.
Komplekto taikymas
Tinka genomo DNR išgryninimui iš šių mėginių: žandikaulio tamponų, FTA kortelės (kraujo dėmės).
Sandėliavimas ir galiojimo laikas
-Šis rinkinys gali būti laikomas 12 mėnesių sausomis sąlygomis kambario temperatūroje (15-25°C);jei reikia laikyti ilgesnį laiką, galima laikyti 2-8°C temperatūroje.
Pastaba: jei laikomas žemoje temperatūroje, tirpalas gali nusodinti.Prieš naudodami tirpalą būtinai tam tikrą laiką padėkite į rinkinį kambario temperatūroje.Jei reikia, 10 minučių pakaitinkite 37°C vandens vonioje, kad ištirptų nuosėdos, ir prieš naudojimą sumaišykite.
-Foregene Protease tirpalas turi unikalią formulę, kuri yra aktyvi ilgą laiką (3 mėnesius) laikant kambario temperatūroje;jo aktyvumas ir stabilumas bus geresnis laikant 4°C temperatūroje, todėl rekomenduojama laikyti 4°C temperatūroje, nepamirškite nelaikyti -20°C temperatūroje.
Valymo kolonėlė užsikimšusi
Šiame rinkinyje genominės DNR ekstrahavimo operacijos metu gryninimo kolonėlė yra tiesiogiai adsorbuojama ant mėginio fermentinės lizės mišinio be centrifugavimo etapo, o valymo kolonėlė gali būti užblokuota dėl nepilno fermentacijos ir didelio mėginio klampumo.
Toliau išvardytos galimos priežastys:
1. Neužbaigtas fermentinis audinių mėginių virškinimas.
Rekomendacija: Foregene Protease mėginio apdorojimo laikas gali būti atitinkamai pratęstas arba supernatantas gali būti paimtas po centrifugavimo 12 000 aps./min (~13 400 × g) 5 minutes.
2. Per didelis audinių mėginių arba didelių audinių naudojimas.
Rekomendacija: Mėginyje geriausia neviršyti 1 žandinio tepinėlio;jei mėginys per didelis, atitinkamai padidinkite buferio ST1, Foregene Protease ir buferio ST2 dozę.
3. Mėginio klampumas per didelis.
Rekomendacija: prieš genominės DNR ekstrakciją mėginius galima tinkamai atskiesti 10 mM Tris-HCl.
4. Išsiurbti kraujo kortelės fragmentai.
Rekomendacija: kraujo dėmės (FTA kortelės) genomo ekstrahavimo 6 veiksmo trumpalaikis centrifugavimo laikas gali būti atitinkamai pratęstas.
Mažas derlius arba jo nėra DNR
Dažnai yra įvairių veiksnių, turinčių įtakos genomo DNR išeigai, įskaitant mėginio kilmę, mėginių laikymo sąlygas, mėginio paruošimą, manipuliavimą ir kt.
Ekstrahuojant genomo DNR gauti negalima
Galimos priežastys yra šios:
1. Netinkamas mėginių konservavimas arba per ilgas laikymas sukelia genomo DNR degradaciją.
Rekomendacija: pageidautina, kad iš burnos tamponų būtų paimti švieži mėginiai, o genominės DNR ekstrahavimo operacijoms nepatartina naudoti konservuotų tepinėlių;kraujo dėmių mėginiai turėtų užtikrinti, kad kokybė būtų kvalifikuota, o laikymo laikas neturėtų būti per ilgas.
2. Naudojant per mažai audinių, atitinkamos genomo DNR gali nepavykti išgauti.
Rekomendacija: vadovaukitės operacijos vadove pateiktomis žandinio tepinėlio mėginių ėmimo instrukcijomis ir nuvalykite kuo daugiau kartų, kad prie burnos tampono būtų galima pritvirtinti pakankamai ląstelių genomo DNR ekstrakcijai;kraujo dėmių mėginiui paimti galima atitinkamai padidinti kraujo dėmių pjovimo plotą.
3. Foregene Protease yra netinkamai konservuota, todėl sumažėja jos aktyvumas arba inaktyvuojama.
Rekomendacija: Patvirtinkite Foregene Protease laikymo sąlygas arba pakeiskite ją nauja Foregene Protease fermentinei reakcijai.
4. Netinkamas rinkinio konservavimas arba laikymo laikas yra per ilgas, todėl kai kurie rinkinio komponentai sugenda.
Rekomendacija: įsigykite naują žandinio tampono DNR izoliavimo rinkinį susijusioms procedūroms.
5. Buferis WB neprideda absoliutaus etanolio.
Rekomendacija: įsitikinkite, kad buferis WB prideda reikiamą absoliutaus etanolio kiekį.
6. Eliuentas netinkamai įpiltas į silikoninę plėvelę.
Rekomendacija: Į silikoninės membranos vidurį įlašinkite 65 °C pašildyto eliuento lašus ir palikite kambario temperatūroje 5 min., kad padidintumėte eliuavimo efektyvumą.
Išskirta mažo derlingumo genomo DNR
Toliau išvardytos galimos priežastys:
1. Netinkamas mėginių konservavimas arba per ilgas laikymas sukelia genomo DNR degradaciją.
Rekomendacija: pageidautina, kad iš burnos tamponų būtų imami švieži mėginiai, o konservuoti tamponai neturėtų būti naudojami genomo DNR ekstrakcijai.
2. Jei audinio mėginio kiekis yra per mažas, išskirtos genominės DNR kiekis bus mažesnis.
Rekomendacija: vadovaukitės naudojimo vadove pateiktomis burnos tamponų mėginių ėmimo instrukcijomis, nušluostykite kuo daugiau kartų, kad prie burnos tampono būtų galima pritvirtinti pakankamai ląstelių genomo DNR ekstrakcijai.
3. Foregene Protease yra netinkamai konservuota, todėl sumažėja jos aktyvumas arba inaktyvuojama.
Rekomendacija: Patvirtinkite Foregene Protease laikymo sąlygas arba pakeiskite ją nauja Foregene Protease fermentinei reakcijai.
4. Eliuento problemos.
Rekomendacija: eliuavimui naudokite buferį EB;jei naudojate ddH2O arba kiti eliuentai, patvirtinkite, kad eliuato pH yra 7,0–8,5.
5. Eliuatas lašinamas neteisingai.
Rekomendacija: eliuento lašelius įlašinkite į silikoninės membranos vidurį ir palikite kambario temperatūroje 5 min., kad padidintumėte eliuavimo efektyvumą.
6. Eliuavimo skysčio susikaupia per mažai.
Rekomendacija: Naudokite eliuentą genomo DNR eliuavimui, kaip reikalaujama instrukcijose, ne mažiau kaip 15 μl.
Išskirtos genominės DNR žemas grynumas
Žemas genomo DNR grynumas gali sukelti nesėkmę arba nepatenkinamus tolesnių eksperimentų rezultatus, pavyzdžiui: fermentai negali būti iškirpti, PGR negali gauti dominančio geno fragmento ir pan.
Galimos priežastys yra šios:
1. Heteroproteinų tarša, RNR tarša.
Analizė: gryninimo kolonėlė nebuvo plaunama naudojant buferinį PW;buferio PW plovimo valymo kolonėlė nebuvo plaunama naudojant tinkamą išcentrinį greitį.
Rekomendacija: prieš pildami etanolį įsitikinkite, kad supernatante nėra nuosėdų;būtinai išplaukite valymo kolonėlę pagal instrukcijas ir šio žingsnio negalima praleisti.
2. Priemaišų jonų tarša.
Analizė: Buferio WB plovimo valymo kolonėlė buvo praleista arba plaunama tik vieną kartą, todėl liko joninis užterštumas.
Rekomendacija: Buffer WB būtinai nuplaukite 2 kartus, kaip nurodyta, kad kuo daugiau pašalintumėte likusius jonus.
3. RNR fermentų užterštumas.
Analizė: svetimos RNazės buvo pridėtos į buferį;Buferio PW plovimo operacija buvo neteisinga, todėl susidarė RNazės likučiai, kurie turėjo įtakos tolesniam RNR eksperimentinėms operacijoms, tokioms kaip in vitro transkripcija.
Rekomendacija: Foregene serijos nukleorūgščių išskyrimo rinkiniai gali pašalinti RNR papildomai nepridedant RNazės, todėl žandinio tampono/FTA kortelės DNR išskyrimo rinkinyje nereikia pridėti RNazės;būtinai laikykitės buferio PW plovimo valymo kolonėlės instrukcijų ir šio veiksmo negalima praleisti.
4. Etanolio likutis.
Analizė: Buferis WB neatliko tuščio mėgintuvėlio centrifugavimo po valymo kolonėlės plovimo.
Rekomendacija: Atlikite teisingą tuščio mėgintuvėlio centrifugavimo operaciją pagal instrukcijas.
5. Kita tarša priemaišomis.
Analizė: išsaugoti mėginiai arba specialūs mėginiai iš anksto neapdorojami.
Rekomendacija: kruopščiai iš anksto apdorokite mėginį, kaip nurodyta.
