Escherichia Coli O157: H7 nukleorūgščių aptikimo rinkinys (PGR fluorescencinio zondo metodas / liofilizacija)
Komplekto aprašymas:
Katė Nr.FP103
Jis naudojamas greitam E. coli O157:H7 aptikimui ir atrankai maisto, pašarų, vandens ir aplinkos mėginiuose.
Aprašymai
Jis naudojamasgreitas E. coli O157:H7 aptikimas ir atranka maisto, pašarų, vandens ir aplinkos mėginiuose.
[Bandymo principas]
Pagal fluorescencinės PGR technologijos principą, specifiniam Escherichia coli O157: H7 genui sukurti specifiniai pradmenys ir Taqman zondai, aptikti fluorescenciniu PGR prietaisu, kad būtų galima aptikti Escherichia coli O157: H7 Kokybinis DNR aptikimas.
Rinkinio turinys
Pastaba: ROX kanalo zondas nėra įtrauktas.
| Ckomponentai | Specifikacija | Qsuma |
| Buferis A | Vamzdis | 1 |
| Buferis B | Vamzdis | 1 |
| Teigiamas valdymas | Vamzdis | 1 |
| Neigiama kontrolė | Vamzdis | 1 |
Numatomas naudojimas
Jis naudojamas greitas E. coli O157:H7 aptikimas ir atranka maisto, pašarų, vandens ir aplinkos mėginiuose.
Laikymo sąlygos ir galiojimo laikas
Laikyti -20 ℃ temperatūroje tamsoje ir vengti pakartotinio užšaldymo ir atšildymo.
Galiojimo laikas yra 12mėnesių, o pagaminimo data nurodyta ant išorinės pakuotės.
Priemonės ir eksploatacinės medžiagos
Fluorescencinis kiekybinis PGR prietaisas, pipetės pistoletas ir atitinkami antgaliai, sūkurinė purtyklė, mini centrifuga.
Naudojimas
1. Mėginių apdorojimas
1.1 Mėginio tipas: Šis rinkinys tinka maisto, pašarų, vandens mėginiams ir kitiems mėginiams, kurie įtariami užkrėsti Escherichia coli O157:H7.Giliai apdorotus mėsos gaminius, gėrimus ir kitas medžiagas, kuriose yra pigmentų, reikia nuplauti, kad nepakenktų fluorescencinio signalo rinkimui.
1.2 Mėginio apdorojimas: žr. „GB 4789.10-2016 Maisto saugos nacionalinis standartas Maisto mikrobiologinis Escherichia coli O157 tyrimas: H7 testas“ dėl mėginio paruošimo, sodrinimo kultūros ir Escherichia coli O157: H7 išskyrimo.
- Nukleino rūgšties ekstrahavimas
Paimkite 20 ml sodrinimo tirpalo į 1,5 ml centrifugos mėgintuvėlį, įpilkite 200 μL mikrobinio lizato (reikalingas papildomas rinkinys), sumaišykite 30 sekundžių, trumpai centrifuguokite ir atidėkite.
Pastabos: Nukleino rūgšties ekstrahavimas iš lizato turi būti baigtas per 10 minučių ir negali būti laikomas ilgą laiką.
3. Nukleino rūgščių amplifikacija
3.1 Norėdami naudoti, įjunkite fluorescencinį kiekybinį PGR prietaisą.
Buferiai A ir Buferiai B iš rinkinio, gerai juos ištirpinkite ir trumpai centrifuguokite.Į kiekvieną PGR reakcijos mėgintuvėlį įpilkite 18 μL buferio A ir 2 μL buferio B.Tada į PGR reakcijos mėgintuvėlius įpilkite po 5 ml neigiamos kontrolės, ekstrahuotos nukleino rūgšties ir teigiamos kontrolės, uždenkite mėgintuvėlius ir trumpai centrifuguokite.
3.3 Perkelkite PGR reakcijos mėgintuvėlį į fluorescencinį PGR įrenginį ir atlikite amplifikacijos eksperimentus atlikdami šias procedūras: reakcijos sistemai pasirinkite 25 ml, kiekvienam ciklui surinkite fluorescencinius signalus 60 °C temperatūroje ir aptikimo kanalui pasirinkite FAM.
| Žingsnis | Programa | Ciklų skaičius |
| 1 | 37 ℃ 5 min | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 min | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 4 0 |
| 60 ℃ 30 s (surinkti fluorescenciją) |
Problemų analizės vadovai
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
RNR negalima išgauti arba nukleino rūgšties išeiga yra maža
Paprastai yra daug veiksnių, turinčių įtakos regeneravimo efektyvumui, pavyzdžiui: mėginio RNR kiekis, veikimo būdas, eliuavimo tūris ir kt.
Įprastų priežasčių analizė:
1.Ledo vonia arba žemos temperatūros (4 °C) centrifugavimas veikimo metu.
Patarimas: Kambario temperatūros (15-25 °C) veikimas, niekada nenaudokite ledo vonios ir žemos temperatūros centrifugos.
2. Netinkamas mėginių laikymas arba per ilgas mėginių laikymas.
Patarimas: Mėginius laikykite -80 °C temperatūroje arba užšaldykite skystame azote, venkite pakartotinio užšaldymo ir atšildymo;pabandykite naudoti ką tik paimtus mėginius RNR ekstrakcijai.
3. Nepakankama mėginio lizė
Rekomendacija: įsitikinkite, kad mėginys ir darbinis tirpalas (linijinis akrilamidas) buvo kruopščiai sumaišyti ir inkubuojami 10 minučių kambario temperatūroje (15-25 °C).
4. Eliuentas buvo pridėtas neteisingai
Rekomendacija: Įsitikinkite, kad RNase-Free ddH2O būtų pridėta į valymo kolonėlės membranos vidurį
5. Netinkamas bevandenio etanolio kiekis buferyje viRW2
Patarimas: vadovaukitės instrukcijomis, įpilkite reikiamą kiekį bevandenio etanolio į buferį viRW2 ir gerai išmaišykite prieš naudodami rinkinį.
6.Netinkamas mėginio naudojimas.
Siūlymas: 200 µl mėginio 500 µl buferio viRL.Per didelis mėginio tūris sumažins RNR ekstrahavimo greitį.
7.Netinkamas eliuavimo tūris arba nepilnas eliuavimas.
Siūlymas: gryninimo kolonėlės eliuento tūris yra 30-50μl;jei eliuavimo efektas nėra patenkinamas, rekomenduojama įpilti iš anksto pašildyto RNase-Free ddH2O ir pailginkite laikymo kambario temperatūroje laiką, pvz., 5-10min
8. Išplovus buferiu viRW2, valymo kolonėlėje yra etanolio likučių.
Patarimas: Jei po skalavimo buferiu viRW2 ir centrifugavimo tuščiame mėgintuvėlyje 2 min. lieka etanolio, po centrifugavimo tuščiame mėgintuvėlyje valymo kolonėlę galima palikti kambario temperatūroje 5 min., kad būtų visiškai pašalintas likęs etanolis.
Išgrynintų RNR molekulių skilimas
Išgrynintos RNR kokybė yra susijusi su tokiais veiksniais kaip mėginio saugojimas, užterštumas Rnaze ir veikimas.
Įprastų priežasčių analizė:
1. Paimti mėginiai nebuvo laiku išsaugoti.
Patarimas: Jei po paėmimo mėginys nepanaudojamas laiku, nedelsdami laikykite jį -80 ℃ temperatūroje arba skystame azote.Jei įmanoma, RNR molekulėms išgauti stenkitės naudoti šviežiai paimtus mėginius.
2. Paimti mėginiai buvo pakartotinai užšaldomi ir atitirpinami.
Patarimas: mėginio ėmimo ir laikymo metu vengti pakartotinio užšaldymo ir atšildymo (ne daugiau kaip vieną kartą), kitaip sumažės nukleino rūgšties išeiga.
3. Operacinėje buvo įvesta RNazė arba nedėvėti vienkartinių pirštinių, kaukių ir pan.
Pasiūlymas: RNR molekulių ekstrahavimo eksperimentą geriausia atlikti atskiroje RNR operacinėje patalpoje, o eksperimento stalas prieš eksperimentą nuvalomas.Eksperimento metu dėvėkite vienkartines pirštines ir kaukes, kad išvengtumėte RNR degradacijos, kurią sukelia RNazės įvedimas.
4. Naudojimo metu reagentas yra užterštas RNaze.
Patarimas: susijusiems eksperimentams pakeiskite nauju virusinės RNR izoliacijos rinkiniu.
5. Centrifugos mėgintuvėlių, pipetės antgalių ir tt užteršimas RNaze. Patarimas: Įsitikinkite, kad centrifugos mėgintuvėliuose, pipetės antgaliuose ir pipetėse nėra RNazės.
Išgrynintos RNR molekulės paveikė tolesnius eksperimentus
RNR molekulės, išgrynintos valymo kolonėlėje, turės įtakos tolesniems eksperimentams, jei yra per daug druskos jonų arba baltymų, pvz., atvirkštinė transkripcija, Northern blot ir kt.
1.Iliuotose RNR molekulėse yra likusių druskų jonų.
Rekomendacija: Įsitikinkite, kad į buferį viRW2 buvo įpiltas reikiamas kiekis bevandenio etanolio, ir du kartus išplaukite valymo kolonėlę pagal teisingą centrifugavimo greitį, nurodytą naudojimo instrukcijose；Jei dar liko druskos jonų, į valymo kolonėlę galite įpilti buferio viRW2 ir palikti kambario temperatūroje 5 min.Tada atlikite centrifugavimą, kad kuo labiau pašalintumėte druskos jonų užterštumą
2.Iliuotose RNR molekulėse liko etanolio
Patarimas: įsitikinę, kad valymo kolonėlės buvo išskalautos buferiu viRW2, centrifuguokite tuščiame mėgintuvėlyje pagal naudojimo instrukcijose nurodytą išcentrinį greitį.Jei vis dar liko etanolio, po centrifugavimo tuščiame mėgintuvėlyje jį galima palikti 5 minutėms kambario temperatūroje, kad būtų pašalintas didžiausias likęs etanolis.
Instrukcijų vadovai:
Virusinės RNR izoliacijos rinkinio naudojimo vadovas
