„EndoFree Maxi Plasmid“ rinkinys (sukimo kolonėlė)
apibūdinimas
„EndoFree Maxi Plasmid Kit“ naudoja unikalią silicio dioksido membranos adsorbcijos techniką, kad efektyviai ir konkrečiai surištų plazmidinę DNR.Sujungus specialų endotoksinų šalinimo buferį P4 ir EndoFree Maxi filtravimo kolonėles, galima efektyviai pašalinti endotoksiną, baltymus ir kitas nešvarumus.Visas ištraukimo procesas trunka tik 1 valandą, todėl užtikrinamas patogus ir greitas veikimas.
Rekomenduojamas bakterijų kiekis kiekvienai praktikai: didelės kopijos plazmidėms rekomenduojama naudoti 100 ml bakterijų auginimo terpės, iš kurios paprastai gaunama apie 500–1500 μg.Mažos kopijos plazmidėms rekomenduojama 200 ml bakterijų auginimo terpės, kad susidarytų maždaug 200–600 μg plazmidžių.
Komplekto komponentai
Produktas Komponentai | D909-E(10 pasiruošimų) |
Buferis BL | 30 ml |
Buferis P1 | 100 ml |
Buferis P2 | 100 ml |
Buferis P4 | 100 ml |
Buferis DW2 | 44 ml |
Buferis EB | 30 ml |
RNazė A (10 mg/ml) | 1 ml |
„DNAPure Maxi“ sukimo kolonėlės | 10 vnt |
FinePure Maxi filtro švirkštas | 10 vnt |
50 ml surinkimo tūbelės | 10 vnt |
Plazmidinės DNR koncentracijos ir grynumo nustatymas
Išskirtos plazmidinės DNR grynumą ir koncentraciją galima nustatyti agarozės gelio elektroforeze ir ultravioletinių spindulių spektrofotometru.OD260 vertė 1 atitinka maždaug 50 μg/ml dvigrandės DNR.Išgrynintos plazmidės DNR OD260/OD280 vertė paprastai yra 1,7-1,9 intervale.Išgryninta plazmidinė DNR gali būti tiesiogiai naudojama eksperimentams, kuriems taikomi dideli grynumo reikalavimai, pavyzdžiui, ląstelių transfekcijai arba in vivo eksperimentams.
Komplekto taikymas
Šiuo rinkiniu išskirta plazmidinė DNR gali būti naudojama atliekant įvairias įprastas operacijas, įskaitant fermentinį skaidymą, PGR, sekos nustatymą, ligavimą, transformaciją, taip pat įvairių tipų ląstelių transfekciją.
Sandėliavimas ir galiojimo laikas
EndoFree Maxi Plasmid Kit gali būti laikomas kambario temperatūroje (15-25°C) sausomis sąlygomis iki 12 mėnesių.Prieš pirmą naudojimą įpilkite RNazės A į buferį P1, gerai išmaišykite ir laikykite 2–8 °C temperatūroje.Mišinį galima stabiliai laikyti ilgiau nei 6 mėnesius.