Problemų analizės vadovas

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Mažas derlius arba jo nėra DNR

Paprastai yra daug veiksnių, turinčių įtakos genominės DNR išeigai, įskaitant mėginio šaltinį, mėginio amžių, mėginio laikymo sąlygas ir operaciją.

Ekstrahuojant genomo DNR gauti nepavyko

1. Audinių mėginiai yra netinkamai arba per ilgai laikomi, todėl genominė DNR degraduoja.

Rekomendacija: audinių mėginius laikykite skystame azote arba -20°C;bandyti panaudoti naujai surinktus mėginius genomo DNR ekstrakcijai.

2. Dėl per mažo mėginio kiekio atitinkama genomo DNR gali būti neišskirta.

Patarimas: audinių mėginiams, kurie buvo saugomi ilgą laiką arba kurių genominė DNR yra smarkiai suskaidyta, audinių mėginių kiekį galima atitinkamai padidinti, kad būtų galima išskirti didelę genominę DNR.Mėginio kiekis gali būti nustatytas pagal DNR poreikius, tačiau šviežias mėginys neturi viršyti 100 mg, o sausas – 30 mg.

3. Mėginys nesumalamas skystu azotu arba per ilgai dedamas po skysto azoto.

Pasiūlymas: Ekstrahuojant DNR mėginį reikia visiškai sumalti skystu azotu, kad būtų pažeista ląstelės sienelė;po sumalimo perkelkite mėginio miltelius į PL1, pašildytą iki 65 laipsnių°C kuo greičiau (kai sumalti milteliai ištirps, genomo DNR pradės greitai irti) .

4. Netinkamas Foregene Protease laikymas sumažina arba inaktyvuoja aktyvumą.

Rekomendacija: Patvirtinkite Foregene Protease laikymo sąlygas arba pakeiskite ją nauja Foregene Protease fermentinei hidrolizei.

5. Rinkinys laikomas netinkamai arba laikomas per ilgai, todėl kai kurie rinkinio komponentai sugenda.

Rekomendacija: įsigykite naują augalų genominės DNR ekstrahavimo rinkinį susijusioms operacijoms.

6. Netinkamas rinkinio naudojimas.

Pasiūlymas: Įsigykite augalų DNR izoliavimo rinkinį, skirtą augalų genominės DNR ekstrahavimo ir gryninimo mėginiams.

7. Buferis WB nepridedant abevandenis etanolis.

Rekomendacija: Į buferį WB būtinai įpilkite reikiamo tūrio absoliutaus etanolio.

8. Eliuentas nebuvo tinkamai lašinamas ant silicio dioksido membranos.

Patarimas: pridėkite iš anksto pašildytą eliuentą iki 65 laipsnių℃lašinamas iki silikagelio membranos vidurio ir palikite kambario temperatūroje 5 minutes, kad padidintumėte eliuavimo efektyvumą.

Ekstrahavimas, siekiant gauti mažos išeigos genominę DNR

1. Mėginys laikomas netinkamai arba laikomas per ilgai, todėl genominė DNR degraduoja.

Rekomendacija: audinių mėginius laikykite -20 temperatūroje℃;bandyti panaudoti naujai surinktus audinių mėginius genomo DNR ekstrakcijai.

2. Jei audinių mėginių kiekis yra per mažas, išskirtos genomo DNR bus mažiau.

Patarimas: Kai kuriuose augalų mėginiuose yra daug vandens, pavyzdžiui, vandens augaluose, tokiuose kaip dumbliai ir kt., dozę galima atitinkamai padidinti arba vandenį galima šiek tiek dehidratuoti prieš operaciją.

3. Mėginiai nebuvo kruopščiai sumalti skystu azotu arba per ilgai po sumalimo buvo palikti kambario temperatūroje.

Siūlymas: turi būti pakankamai sumaltas skystas azotas, o mėginio ląstelės sienelė turi būti kiek įmanoma sulaužyta;iš karto po sumalimo mėginio milteliai turi būti perkelti į 65℃pašildytas buferis PL1 kitam veiksmui.

4. Nenaudojamas tinkamas rinkinys.

Rekomendacija: naudokite tam skirtą Augalų DNR izoliavimo rinkinį, kad ištrauktumėte ir išvalytumėte augalų genominę DNR.

5. Netinkamas Foregene Protease laikymas sumažina arba inaktyvuoja aktyvumą.

Rekomendacija: Patvirtinkite Foregene Protease laikymo sąlygas arba pakeiskite ją nauja Foregene Protease fermentinei hidrolizei.

6. Eliuento problema

Rekomendacija: eliuavimui naudokite buferį EB;jei naudojate ddH₂O arba kitus eliuentus, įsitikinkite, kad eliuento pH yra 7,0–8,5.

7. Netinkamai lašinamas eliuentas

Patarimas: Įlašinkite eliuavimo lašą į silicio dioksido membranos vidurį ir palikite kambario temperatūroje 5 minutes, kad padidintumėte eliuavimo efektyvumą.

8. Eliuento tūris per mažas

Patarimas: Naudokite genominės DNR eliuentą pagal instrukcijas, ne mažiau kaip 100μl.

Išskirta žemo grynumo genominė DNR

Žemas genominės DNR grynumas sukels nesėkmę arba prastą tolesnių eksperimentų poveikį, pavyzdžiui: fermentas negali būti supjaustytas ir tikslinio geno fragmento negalima gauti PGR.

1. Įvairus baltymų užterštumas, RNR užterštumas.

Analizė: Buferis PW nebuvo naudojamas kolonėlės plovimui;Buferis PW nebuvo naudojamas kolonelei plauti tinkamu centrifugavimo greičiu.

Patarimas: pabandykite užtikrinti, kad supernatante nebūtų nuosėdų, kai supernatantas praleidžiamas per kolonėlę;būtinai išplaukite valymo kolonėlę Buffer PW pagal instrukcijas ir šio veiksmo negalima praleisti.

2. Priemaišų jonų tarša.

Analizė: Buffer WB plovimo kolonėlė buvo praleista arba plaunama tik vieną kartą, todėl liko joninis užterštumas.

Rekomendacija: Būtinai du kartus nuplaukite su Buffer WB pagal instrukcijas, kad kiek įmanoma pašalintumėte likusius jonus.

3. Rnazės užterštumas.

Analizė: į buferį pridedama egzogeninė RNazė;neteisingas plovimas buferyje PW sukels liekamąją RNazę ir turės įtakos tolesniam RNR eksperimentinėms operacijoms, tokioms kaip in vitro transkripcija.

Pasiūlymas: Foregene serijos nukleorūgščių ekstrahavimo rinkiniai gali pašalinti RNR be papildomos RNazės, o visiems augalų DNR išskyrimo rinkinyje esantiems reagentams RNazės nereikia;būtinai išplaukite valymo kolonėlę Buffer PW pagal instrukcijas ir šio veiksmo negalima praleisti.

4. Etanolio likučiai.

Analizė: Nuplovus valymo kolonėlę buferiu WB, tuščio mėgintuvėlio centrifugavimas nebuvo atliktas.

Rekomendacija: vadovaukitės tinkamo tuščio mėgintuvėlio centrifugavimo instrukcijomis.

Instrukcijų vadovas:

Augalų DNR izoliavimo rinkinio naudojimo vadovas