Tiesioginis RT-qPCR rinkinys II
Komplekto aprašymas:
◮Tiesioginis RT-qPCR rinkinys, naudojant Foreasy atvirkštinę transkriptazę ir Foreasy HS Taq DNR polimerazę, sukurtą Foregene, su unikaliu reakcijos buferiu, suteikia šiam rinkiniui didelį atsparumą ir suderinamumą ir gali tiesiogiai išbandyti reakciją naudojant Foregene Lysis sistemą kaip šabloną.Šis rinkinys gali būti taikomas COVID-19 nukleorūgščių aptikimo rinkiniui ir kitų patogeninių bakterijų nukleorūgščių aptikimo rinkinių kūrimui.
apibūdinimas
Tiesioginis RT-qPCR rinkinys suteikia atskirai supakuotą RT-qPCR buferį, didelio efektyvumo Foreasy HS Taq DNR polimerazęir Foreasy atvirkštinė transkriptazė (MMLV),todėl patogu kurti galinius rinkinius ir reguliuoti sistemą, atliekant paprastą patikrinimą.
Tiesioginis RT-qPCR rinkinys, naudojant Foreasy atvirkštinę transkriptazę ir Foreasy HS Taq DNR polimerazę, sukurtą Foregene, su unikaliu reakcijos buferiu, suteikia šiam rinkiniui didelį atsparumą ir suderinamumą ir gali tiesiogiai išbandyti reakciją naudojant Foregene Lysis sistemą kaip šabloną.Šis rinkinys gali būti taikomas COVID-19 nukleorūgščių aptikimo rinkiniui ir kitų patogeninių bakterijų nukleorūgščių aptikimo rinkinių kūrimui.
Šis rinkinys gali būti tiesioginis IVD gaminio komponentas, kurį galima lengvai ir greitai naudoti.Jį reikia tik lengvai patikrinti, nekuriant iš naujo.
Specifikacijos
500 t, 50 000 t
Komplekto komponentai
| Rinkinio turinys (20 μL reakcijos sistema) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50 000 T | |
| Foreasy Reverse transkriptazė (200 U/μL) | 50 μl×1 | 1 ml×5 |
| Foreasy HS Taq DNR polimerazė (5 U/μL) | 100 μl×1 | 1 ml×10 |
| 2 × tiesioginis RT-qPCRBuferis | 1 ml × 5 | 500 ml × 1 |
| Instrukcija | 1 | 1 |
Veikimo žingsniai
A: Paruoškite šabloną ir reagentą
1. Paruoškite paruoštą RNR šabloną (RNR šablonui išgauti ir išvalyti rekomenduojama naudoti Foregene Total RNA Isolation Kit serijos rinkinį) arba mėginio krekingo produktą (rekomenduojama naudoti Foregene Lysis sistemą), specifinius pradmenis (10 μM) ir kitas susijusias eksploatacines medžiagas, instrumentą.
2. Įdėkite 2 × tiesioginį RT-qPCR buferį, RNase-Free ddH2O ir 20 × ROX etaloninius dažus (jei reikia) į dėžutę su ledu, kad jie natūraliai ištirptų ir švelniai išmaišykite.
B: Paruoškite RT-qPCR sistemą
Gaukite pusę reakcijos sistemos reakcijos buferio tūrio (pavyzdžiui, jei sistemos tūris yra 20 μL, reikia gauti 10 μL 2× Direct RT-qPCR buferio). Dėlatitinkamas fermento kiekis, mes tai siūlomeM-MLV：10-30 U/20 μL reakcijos sistema,TaqDNR polimerazė：1-2 U/20 μL reakcijos sistematai yra mūsų pasiūlymas, turėtumėte jį išbandyti ir pakoreguoti), pridėkite RNR šabloną, specifinius pradmenis ir zondus ir pridėkite ddH be RNazės2O iki 20 μl.Specifinį RT-qPCR reakcijos sistemos paruošimą galima rasti šioje 1 lentelėje.
1 lentelė. RT-qPCR sistemos paruošimas
| Komponentas | Apimtis | Galutinė koncentracija |
| 2 × tiesioginis RT-qPCR buferis | 10 μl | 1× |
| Foreasy atvirkštinė transkriptazė (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNR polimerazė | 1-2 U | |
| Pirminis gruntas (10 μM) | 0,8 μl | 50-900 nM |
| Atvirkštinis gruntas (10 μM) | 0,8 μl | 50-900 nM |
| Zondas (4 μM) | 1 μl | 200nM |
| Šablonas (RNR arba lizatas) | X μL | |
| 20× ROX etaloninis dažiklis | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Bendras tūris | 20 μl |
Pastaba: Forward Primer ir Reverse Primer yra specifiniai tikslinio geno pradmenys.qPCR sistema gali būti koreguojama pagal praktinius eksperimentinius ir PGR modelius.Galutinei daugumos pradmenų koncentracijai rekomenduojame 400 nM.Sureguliuokite konkrečių pradmenų ir zondų tūrį pagal paruoštą koncentraciją ir rekomenduojamą galutinę koncentraciją.
1*: pasirinkite tinkamą galutinę ROX etaloninio dažo koncentraciją pagal skirtingus kiekybinius PGR prietaisus.Įprastų kiekybinių PGR prietaisų optimali ROX etaloninių dažų koncentracija parodyta lentelėje:
| Kiekybiniai PGR instrumentai | Galutinė ROX etaloninio dažo koncentracija |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Step One,ir tt | 1 × (pavyzdžiui, į 20 μL reakcijos sistemą įpilkite 1 μl 20 × ROX etaloninio dažiklio) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P ir Mx4000 ir kt. | 0,5 × (pavyzdžiui, į 20 μL reakcijos sistemą įpilkite 0,5 μl 20 × ROX etaloninio dažiklio) |
| Roche PGR prietaisas, Bio-Rad PGR prietaisas, Eppendorf kiekybinis PGR instrumentas ir kt. | Be ROX etaloninių dažų |
Sandėliavimas ir galiojimo laikas
Rinkinys turi būti laikomas -20 ± 5 ℃ temperatūroje.Jis turi būti nedelsiant laikomas -20 ℃ termostatiniame šaldytuve.Galiojimo laikas yra 2 metai, jei jis laikomas tinkamos būklės.
